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第一部分NMDA诱导小鼠视网膜兴奋毒性损伤模型的特征目的：研究N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate, NMDA)诱导视网膜兴奋毒性损伤小鼠模型的形态和功能特征。方法：6周龄C57BL/6J小鼠随机分为低、中、高三个剂量组,玻璃体腔内分别注射NMDA10、20、30nmol,建立视网膜兴奋损伤动物模型。我们在整体动物水平通过眼底照相、视网膜电图(electroretinogram, ERG);在组织学水平通过视网膜铺片荧光血管染色、视网膜石蜡切片HE染色、视神经甲苯胺蓝染色、全视网膜铺片Brn-3a免疫荧光染色及RGCs计数观察术后6h、12h、24h、48h、7dRGCs的损伤情况。结果：NMDA干预后24 h,RGCs数量明显减少,IPL厚度变薄。眼底视网膜呈苍白色改变,血管迂曲痉挛。Isolectin IB4荧光染色显示视网膜血管,观察到MDA造模后,24h内视网膜血管结构未见明显损伤。ERG显示a波和b波潜伏期的变化不大,b波振幅下降。光镜下可见RGCs密度逐渐降低；视神经轴索呈退行性变,与NMDA的作用时间呈正相关。RGCs计数显示NMDA诱导的RGC减少主要集中于术后一天,24 h RGCs数量减少83.97%(P<0.01)。结论：玻璃体腔内注射NMDA可诱导RGCs的显著减少和视网膜功能损害,与急性青光眼性损伤具有相似性,可为视神经保护研究提供研究条件。检测ERG b波,对于诊断和评估视网膜兴奋损伤具有一定的意义。第二部分NMDA诱导视网膜视杆双极细胞功能性PKCa转运的机制研究目的：观察NMDA诱导的视网膜兴奋毒性损伤小鼠模型中视杆-双极细胞中重要的功能性PKCa转运现象并探讨其机制。方法：6/3周龄C57BL/6J小鼠玻璃体腔内注射NMDA30 nmol,建立视网膜兴奋损伤动物模型。分别在损伤后12 h、24 h、48 h取出视网膜,利用视网膜切片免疫荧光及TUNEL凋亡染色,观察视网膜的分层以及细胞存活情况、PKCa标记的视杆-双极细胞及NMDA受体各亚基在视网膜上的突触表达；利用全细胞膜片钳技术,记录视网膜各类型双极细胞的电生理特性改变；通过单细胞PCR方法,检测视杆-双极细胞中mGluR6-Go-TRPMl信号通路相关组成和调控因子的mRNA水平。结果：观察到NMDA在诱导内层视网膜RGCs急性凋亡的同时,视杆-双极细胞内出现功能性PKCa转运的现象；证实与外丛状层上NR1、NR2B、NR2D亚基的突触表达量明显升高存在空间一致性。利用全细胞膜片钳技术,揭示了NMDA可特异性诱导视杆-双极细胞mGluR6的功能变化,对光反应消失,且损伤具有可逆性。进一步通过单细胞PCR检测,NMDA造模后GDIs的上调和部分GAPs、RGS的下调,共同导致了Gao亚基的失活,TRPM通道开放。结论：玻璃体腔内注射NMDA,可诱导急性的神经节细胞凋亡及双极细胞损伤。通过作用mGluR6-Go-TRPM1这条信号通路,影响视杆双极细胞的生理功能。相关机制研究可对今后治疗人类视杆-双极细胞机制相关的眼病起到指导性作用。