乳腺癌细胞中PRMT2靶基因的鉴定及其调控CCND1的机制研究

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目的:检测并分析乳腺癌细胞中蛋白精氨酸甲基转移酶2(protein argininemethyltransferase2,PRMT2)的下游靶基因,检测PRMT2表达下调后对相关蛋白表达的影响,并初步探讨乳腺癌细胞中PRMT2调控细胞周期蛋白D1(CyclinD1,CCND1)的分子机制。方法:采用基因芯片技术对乳腺癌细胞中PRMT2的下游靶基因进行检测及分析。从基因芯片结果所检测出的PRMT2下游靶基因中,选取较有意义的靶基因,利用荧光定量PCR对其进行进一步的验证和分析。利用Western Blot检测乳腺癌细胞中PRMT2表达下调后对相关蛋白表达的影响,并初步探讨PRMT2调控CCND1的分子机制。结果:1、基因芯片检测显示:PRMT2影响多个基因的表达,这些基因涉及多个生物过程及相应的细胞信号通路,包括:细胞生长、增殖、癌变、转录调节、免疫应答等,其中CCND1是PRMT2的重要靶基因之一。2、荧光定量PCR验证结果提示:乳腺癌细胞中PRMT2基因表达的下调导致靶基因CCND1表达的上调,且与基因芯片的结果保持一致。3、Western Blot检测蛋白的表达结果示:乳腺癌细胞中PRMT2蛋白表达下调后导致CCND1蛋白表达上升,且在雌激素(17β-estrodiol, E2)预处理后更明显。4、Western Blot检测表明:乳腺癌细胞中PRMT2通过影响Akt/GSK-3β细胞信号通路抑制CCND1蛋白的表达。结论:1、乳腺癌细胞中CCND1是PRMT2的下游靶基因,在基因和蛋白水平上均受PRMT2的负向调控。2、乳腺癌细胞中PRMT2通过抑制Akt/GSK-3β细胞信号通路调控CCND1的表达。
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