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目的研究差异表达microRNA与慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虚证、脾胃湿热证的关系,旨在验证前期miRNA基因芯片筛选结果,发现慢性乙型病毒性肝炎上述两证型的特异性miRNAs,并了解慢性乙型病毒性肝炎两证型特异性miRNA的调控机理,为慢性乙型病毒性肝炎辨证分型提供客观化依据,推动慢性乙型病毒性肝炎证候诊断的客观化和规范化建设。方法从课题组前期研究结果中筛选出慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虚证显著性差异表达的9条microRNAs (miR-122-5p、miR-1228-3p、miR-191-3p、miR-4433-5p、 miR-223-3p、miR-23a-3p、miR-1225-3p、miR-1281、miR-21-5p);慢性乙型病毒性肝炎脾胃湿热证显著性差异表达的7条microRNAs (miR-122-5p、miR-1228-3p、 miR-191-3p、miR-4433-5p、miR-1280、miR-150-3p、miR-765),其中4条microRNAs在两证型中重复。运用qRT-PCR (TaqMan探针)技术检测这12条microRNAs在慢性乙型病毒性肝炎患者(10例肝郁脾虚证、10例脾胃湿热证)和3例健康对照者血浆中的表达。采用SPSS 20.0软件对实验中的计数资料、计量资料进行分析。结果1.与健康对照组相比,慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虚证组中miR-122-5p、 miR-1281的表达上调,miR-23a-3p的表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)；miR-1228-3p、miR-1225-3p的表达上调,miR-223-3p、miR-191-3p的表达下调,差异无统计学意义(P>0.05)。2.与健康对照组相比,慢性乙型病毒性肝炎脾胃湿热证组中niR-122-5p的表达上调,miR-1280的表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);miR-1228-3p、miR-191-3p、 miR-150-3p的表达下调,差异无统计学意义(P>0.05)。3.与慢性乙型病毒性肝炎脾胃湿热证组相比,慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虚证组中miR-122-5p、miR-1228-3p、miR-191-3p的表达上调,差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.本研究发现慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虚证患者中存在2条特异性niRNAs: miR-1281、miR-23a-3p,此研究结果与miRNA基因芯片筛选结果一致,可能通过参与细胞增殖、免疫调节、炎性反应、NK细胞活性等过程的调控与慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虚证相关,提示可以作为诊断慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虚证的生物标志物。2.本研究发现慢性乙型病毒性肝炎脾胃湿热证患者中存在1条特异性1niRNA: miR-1280,此研究结果与miRNA基因芯片筛选结果一致,可能通过参与免疫应答、炎症损伤、蛋白质代谢等过程的调控与慢性乙型病毒性肝炎脾胃湿热证相关,提示可以作为诊断慢性乙型病毒性肝炎脾胃湿热证的生物标志物。3.本研究发现慢性乙型病毒性肝炎患者中存在1条特异性miRNA: miR-122-5p,此研究结果与miRNA基因芯片筛选结果一致,可能通过HBV病毒感染复制、肝脏炎症损伤、肝纤维化形成、细胞增殖等过程的调控与慢性乙型病毒性肝炎相关,提示可以作为诊断慢性乙型病毒性肝炎的生物标志物。