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目的: 肾间质纤维化是多种肾脏疾病发展到终末期肾功能衰竭的共同途径。肾间质纤维化的发病机制目前得到了多方面的研究。近年的研究结果表明，小管间质损伤是决定十年肾脏存活率的最重要影响因素，其影响程度远超过肾小球病变程度的影响。肾小管上皮细胞是构成肾小管间质结构的主要细胞之一，正常肾小管周围环境对于维持肾间质的正常生物学行为十分重要，肾小管细胞未控制的过度凋亡导致肾小管局部环境的破坏，可引起肾小管细胞减少、小管萎缩和小管间质纤维化。因此，阻止肾小管细胞过度凋亡，保护肾小管周围环境，可起到预防间质纤维化的作用。环氧化酶（Cyclooxygenase; COX）是前列腺素代谢环节中关键限速酶，其有两种同工酶：COX-1，COX-2。通常认为COX-1参与生理过程，COX-2介导病理环节，多种生长因子、细胞因子和反应性氧代谢产物可诱导COX-2表达上调，在由单侧输尿管梗阻（Unilateral ureteral obstruction; UUO）所引发的肾小管间质纤维化的致病过程中，存在着刺激COX-2大量生成的因素，理论上选择性阻断COX-2在纠正疾病的同时可能不影响机体的生理状态，从而避免了传统非甾体类消炎药物的不良反应。国外新近研究表明，选择性COX-2抑制剂能够减轻UUO大鼠的肾小管间质纤维化病变，认为下调转化生长因子?（Transforming growth factor-???TGF-?）的<WP=4>表达可能是该药的主要作用机制。有研究表明，TGF-?在UUO中可引起肾小管上皮细胞凋亡，抗TGF-?抗体可改善肾小管上皮细胞凋亡情况，故我们推测COX-2抑制剂可能抑制肾小管细胞凋亡，然而，目前有关特异性COX-2抑制剂与肾小管上皮细胞凋亡的研究较少。本实验以UUO建立肾间质纤维化大鼠模型，给以特异性COX-2抑制剂Rofecoxib灌胃方法，作用于该动物模型，取得梗阻侧肾脏标本，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（terminal deoxynucleotidy1 transferasemediated dUTP nick endlabeling; TUNEL）法检测肾小管上皮细胞凋亡情况及Rofecoxib对肾小管上皮细胞凋亡的影响，结合电镜观察肾小管凋亡细胞形态。并通过免疫组织化学及病理，观察用药前后COX-2、TGF-? 1、Ⅰ型胶原（CollagenⅠ;ColⅠ）的表达及肾脏基本病理变化，测定尿中COX-2代谢产物血栓烷素B2 （thromboxane B2; TXB2）的含量，探讨Rofecoxib对肾间质纤维化的保护机制。方法: 选择清洁级健康雄性SD大鼠45只，随机分为假手术组（A组）、 UUO组（B组）、UUO +Rofecoxib治疗组（C组），各 15只。 B、C组2%戊巴比妥（50mg/kg）经腹腔注射麻醉后，行左侧输尿管结扎术建立动物模型，A组只游离输尿管但不结扎。C组Rofecoxib 10mg/kg.d放于适量自来水中灌胃，造模术前1天开始给药，A、B组给予等量自来水灌胃。各组分别于术后3、7、14天分批处死大鼠，每组5只，处死前24小时代谢笼收集尿液，测尿TXB2浓度，处死后取术侧肾组织行HE、Masson染色，COX-2、TGF-??、ColⅠ免疫组织化学检测，肾小管细胞凋亡检测，结果应用<WP=5>图像分析系统进行半定量分析。结果: HE染色A组未见异常，B组3天可见肾小管轻微扩张，间质中少量单核细胞与淋巴细胞浸润。B组7天可见肾小管扩张，间质中单核细胞与淋巴细胞浸润明显。B组14天肾小管扩张明显，间质中大量单核细胞与淋巴细胞浸润。Masson染色可见B组胶原沉积逐渐增加。C组与B组平行相比，肾小管扩张、间质炎细胞浸润及胶原沉积的程度有显著降低（P<0.01）。TUNEL法肾小管上皮细胞凋亡检测可见A组偶见凋亡细胞。B组术后3、7、14天梗阻侧可检测到较多的凋亡细胞。梗阻3天肾髓质远曲小管和集合管发生大量细胞凋亡，皮质肾小管可检测到少量凋亡细胞，梗阻7天、14天，除髓质外，皮质肾小管凋亡细胞逐渐增多，B3、B7、B14之间有显著差异（P<0.01），而C组与B组平行相比，凋亡细胞明显减少（P<0.01）。免疫组织化学结果提示ColⅠ在A组仅为沿肾间质的线样分布，只在肾间质中有少量表达，小球及小管中无阳性表达，A3、A7、A14组间无差异（P>0.05），B组可见ColⅠ大量表达于肾间质，同时部分肾小管细胞胞浆中也有表达。 B3、B7、B14表达量显著上升，随着模型时间延长，ColⅠ表达范围逐渐增大，B3、B7、B14组之间差异显著（P<0.01）。C组与B组平行相比，ColⅠ表达量有显著降低（P<0.01）。TGF-β1在A组少量表达于肾小管细胞胞浆，A3 、A7、A14之间无差异（P>0.05）。随着模型时间延长，B3、B7、B14组较A组表达明显增加（P<0.01），C 组与B组平行相比TGF-β1表达减少（P<0.01）。COX-2在A组大鼠肾皮质未见明显表达，而B组的COX-2蛋白生成量大大增加，表达于肾小管细胞胞浆。C组与B组平行相<WP=6>比COX-2蛋白表达明显减少（P<0.01）。尿TXB2水平A3、A7、A14组之间无明显差异（P>.05），B组尿TXB2水平较A组明显增加（P<0.01），C组与B组平行相比，尿TXB2水平降低（P<0.01）。结论: COX-2参与了UUO发生发展的病理过程。特异性COX-2抑制剂Rofecoxib通过阻断UUO大鼠肾组织COX-2活性，下调其蛋白表达，阻断病理性前列腺素TXB2的生成；下调TGF-??的蛋白合成，减少肾小管细胞的过度凋亡；下调ColⅠ，减少细胞外基质异常积聚，维持肾脏正常生理结构，?