论文部分内容阅读
本文目的能从植物遗传多样性研究的角度,对濒危植物的保护,物种及品种鉴定进行分子标记方法的探索,以期能够为该领域提供方便、实用并且可靠的分子手段。 本研究包括两部分内容。第一部分是以中国特有濒危植物夏蜡梅(Calycanthus chinensis Cheng et S.Y.Chang)为载体,进行濒危植物物种保护鉴定的分子探针开发;第二部分对在长期种植和栽培过程中经自然和人工选择选育出的红楠(Machilus thunbergii Sieb.et Zucc)的4个园艺类型(优良无性系),用DNA分子标记技术(ISSR,Inter-Simple Sequence Repeat)和trn L-F测序技术进行了品种鉴定,以探求它们之间的变异关系,并分析新类型的遗传稳定性。主要研究内容如下: 1) 夏蜡梅,蜡梅科(Calycanthaceae)夏蜡梅属(Calycanthus L.)的一种落叶灌木,属国家二级珍稀濒危植物,初夏开花,花朵洁白硕大,可作为一种观赏树种。自从上世纪60年代,夏蜡梅在中国被发现后,学者们发现它与北美洲的美国夏蜡梅种群呈间断分布,为第三纪孑遗植物,在植物区系研究上有极大的科学价值,是大陆板块漂移说强有力的佐证之一。在本研究中,作者通过ISSR(Inter-simple sequence repeats)分子标记开发了一对SCAR引物,该引物可以将夏蜡梅与其近缘种:美国夏蜡梅(Calycanthus floridus var.floridus),光叶红夏蜡梅(C. floridus var. oblongifolius),浙江蜡梅(Chimonanthus zhejiangensis),柳叶蜡梅(Ch. salicifolius S.Y.Hu),西南蜡梅(Ch. campanulatus R.H.Chang et C.S.Ding),蜡梅(Ch. praecox(Linn.)Link),素心蜡梅(Ch. praecox var. grandiflorus)相区别。具体过程是:通过从ISSR引物扩增出的多态性条带进行大规模筛选,获得了一条夏蜡梅特有的长748bp的条带;将该条带进行切胶回收,克隆测序,然后再用特定软件设计引物,经诊断型PCR(Diagnostic PCRs)检测,该SCAR(Sequence characterized amplified regions)引物能特异性扩增夏蜡梅,而对其它近缘种(所有供试材料)无扩增产物获得。这一物种鉴定的方式不仅快速(PCR的扩增结果只要不超过3个小时即可知晓),更重要的是易于进行,对DNA的质量、数量,