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本试验利用2株1996年和2004年从我国广东地区分离的H5N1亚型禽流感病毒感染4周龄SPF鸭,针对H5N1亚型禽流感病毒对SPF鸭的致病性进行了系统研究。以106 EID50的病毒量鼻腔感染SPF鸭后,于第3、5、7、9 d分别剖杀感染鸭3只,采集喉头拭子、泄殖腔拭子、各组织脏器,进行病毒含量滴定、荧光定量PCR检测、病理组织学和免疫组织化学检验,探讨了H5N1亚型禽流感病毒在鸭体内各脏器的含量、分布、引起的病理变化以及排毒情况。2株禽流感病毒对鸭表现为不同的致病性:GS/GD/1/96毒株对SPF鸭的致死率为0,且无临床症状,剖检后无肉眼可见病理变化,各器官均分离不到病毒,免疫组织化学检测未发现病毒抗原信号;而DK/GDJD/23/04毒株对SPF鸭的致死率为100%,且表现典型的神经症状,剖检可见脑膜点状出血,胸腺出血,脾脏肿大并有坏死灶,肺脏严重充血、出血,腺胃粘膜弥散性出血。病理组织学检查发现全身各脏器以出血、充血、细胞变性坏死和炎性细胞浸润为主要特征的病理变化。各器官均可分离到病毒,脑组织病毒含量最高,免疫组织化学检测发现有病毒抗原信号。应用ELISA、细胞培养技术及CCK测定法,对4周龄SPF鸭感染H5N1 AIV后,其血清中IL-2、IFN-γ的含量,脾脏淋巴细胞对ConA刺激的T淋巴细胞增殖功能动态变化的研究发现,GS/GD/1/96毒株可促使外周血淋巴细胞分泌和释放IL-2和IFN-γ（p＜0.05）,但不能引起外周血T淋巴细胞的转化率的变化;而DK/GDJD/23/04毒株不仅可促使外周血淋巴细胞合成和释:IL-2（p＜0.05）和IFN-γ（p＜0.01）,最主要的是能引起外周血T淋巴细胞的转化率显著降低（P＜0.01）,并引起脾、胸腺及盲肠扁桃体的出血和淋巴细胞减少的变化,说明该病毒具有显著的抑制鸭细胞免疫功能的作用。进一步证实了DK/GDJD/23/04毒株感染后可引起鸭免疫功能抑制。全基因组测序分析表明,2株病毒均为高致病性毒株,在分子结构上,二者HA蛋白上的糖基化位点完全一致,二者HA蛋白的差异有2处,一是DK/GDJD/23/04裂解位点为连续的5个碱性氨基酸（-RRRKK-）,GSGD/1/96为6个连续的碱性氨基酸（-RRRKKR-）;二是在可能的受体结合位点224-229位,DK/GDJD/23/04的氨基酸为RLVPKI,而GSGD/1/96的序列为RLVPEI,即228位氨基酸E到K的变化。二者NA蛋白的差异有2处,一是DK/GDJD/23/04在NA蛋白颈部49-68位缺20个氨基酸,相应的缺失了4个潜在糖基化位点。GSGD/1/96 NA蛋白颈部没有发生缺失。二是DK/GDJD/23/04NA蛋白在386位有糖基化位点,而GSGD/1/96 NA蛋白在386位没有糖基化位点。DK/GDJD/23/04的NA蛋白颈部49-68位20个氨基酸缺失、NS1蛋白在80-84位有5个氨基酸缺失,这些缺失存在于大多数H5N1亚型人源和禽源分离株中,有利于禽流感病毒在家禽中传播,成为2002-2004年流行的优势病毒。上述这些差异可能是2株病毒对鸭致病性差异的重要原因。遗传演化分析表明,二株病毒存在差异,DK/GDJD/23/04与04年及以后的流行株亲缘关系很近,此毒株已在家禽中传播并发生了变异。