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前言:近几十年来,哮喘是儿科呼吸道所有疾病中发病率增长最快的疾病之一,全世界学者对它的研究日益增加,发现了越来越多的与哮喘相关的因素,对哮喘的发病机制、疾病发展因素以及治疗上都有了更深的认识,但到目前为止,还没有完全明确哮喘的发病机制,也没有一种能够彻底治愈哮喘的治疗方案。人类Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)是近年来发现的一类信号传导跨膜受体,可以识别、结合病原体相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP),引发一系列信号转导,导致炎性介质的释放,在天然免疫防御中起重要作用,并且能使抗原提呈细胞(antigen presentation cells,APCs)识别病原体、产生刺激信号而启动获得性免疫反应,因此TLRs是人体先天免疫和获得性免疫的桥梁。TLR7作为TLRs家族中重要的成员,在生理、病理中均起着重要的作用,维持它的正常功能对机体的健康非常重要,功能减低或者功能过度增强都会对机体产生损害,造成相关疾病,如Mφller-Larsen S等对它们的功能进行研究,提示了TLR7和TLR8两个受体在支气管哮喘(以下简称哮喘)中有着重要的作用机制。Du Q.等发现在大鼠哮喘模型中,Imiquimod(一种TLR7的配体)能抑制气道的重塑。Camateros P等发现大鼠模型中TLR7/8配体S28463阻止了慢性哮喘引起的气道重塑。Moisan J等发现在MyD88依赖和非MK2依赖的过敏性哮喘中,TLR7的配体能够防止由过敏原引起的气道高反应和嗜酸细胞增多症,作者提示TLR7的激活在过敏性哮喘中有治疗作用。Roponen M等学者选择TLR7诱导的粘病毒抵御蛋白A、2′5′-寡腺苷酸合成酶mRNA表达和IP-10(interferon-gamma inducible cytokineprotein 10)蛋白水平三项功能性指标,研究显示经过TLR7激动剂激活后,哮喘患者这些指标含量明显比健康人低,同时发现血清总IgE与IP-10呈负相关,这些相关性仅出现于TLR7激活后,而不出现于TLR3激活,作者提示哮喘青少年中的TLR7功能较健康人降低了。以上资料表明,TLR7是与哮喘是非常密切的相关因子,但是Roponen M等学者仅仅对这三个指标的作了研究,而TLR7激活后,通过胞质的TIR功能区向胞内传递信号,引起一系列级联反应,激活NF-κB等转录因子,引起多种炎性细胞因子的分泌,如IL-1、IL-6、IL-12和TNF-α等,这些因子的改变他们则没有作相关研究,并且TLR7本身在哮喘中的表达如何,则无相关文献报道。NF-κB作为TLR7的下游因子,而且也是与哮喘关系密切,所以本次研究我们一并对它与TLR7进行观察。目的:采用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)雾化吸入致敏激发法复制哮喘大鼠模型,观察哮喘模型大鼠肺部组织TLR7和核转录因子NF-κB基因mRNA的表达水平,以及地塞米松(dexamethasone,Dex)干预前后哮喘模型大鼠肺部组织TLR7和核转录因子NF-κB基因mRNA的表达水平变化,探讨TLR7在哮喘发病和皮质激素治疗哮喘中的机制,为进一步探讨哮喘的防治方法奠定一定的基础。方法:1.模型建立和分组27只wister大鼠随机分为3组:哮喘组:大鼠通过OVA腹腔注射、雾化吸入致敏激发法复制哮喘大鼠模型,致敏后第22天开始给予生理盐水5ml/kg口服灌胃,一日一次,连续5天。干预组:大鼠通过OVA腹腔注射、雾化吸入致敏激发法复制哮喘大鼠模型,致敏后第22天开始给予地塞米松5mg/kg口服灌胃,一日一次,连续5天。对照组:大鼠予以生理盐水腹腔注射和雾化吸入,第22天后予生理盐水5ml/kg灌胃,一日一次,连续5天。(对照组处理过程要一样)于末次灌胃后,用腹腔注射2%戊巴比妥钠2.3ml/kg麻醉后处死大鼠,留取标本以备相关检查。将右侧肺组织迅速放入-80℃冰箱用作real time PCR测定。左侧肺组织以中性福尔马林固定,以备病理检测用。2.Real time PCR检测TLR7和NF-κB的mRNA水平采用TRizol法抽提总RNA,逆转录后,应用Takara公司SYBR Green试剂盒对肺组织TLR7和NF-κB的mRNA水平进行检测。3.病理检查中性福尔马林固定组织脱水后予二甲苯透明,用石蜡包埋切片,最后用HE染色和Giemsa染色,进行病理观察。结果:1.哮喘组出现气促等哮喘类似表现;病理发现气道壁增厚、分泌物增加、嗜酸性粒细胞浸润等,符合哮喘表现。2.哮喘组大鼠肺组织中TLR7mRNA表达显著高于对照组(P＜0.001);Dex干预后TLR7mRNA的表达明显下降(P=0.004),但仍然显著高于对照组水平(P＜0.001)。3.哮喘组大鼠肺组织中NF-κB mRNA表达显著高于对照组(P=0.001);Dex干预后NF-κB mRNA的表达明显下降(P=0.006),但仍然显著高于对照组水平(P=0.008)。结论:1.哮喘组大鼠肺组织中TLR7基因的表达显著升高,可能是哮喘发病机制之一。2.Dex治疗后TLR7基因的表达明显下降,但仍然明显高于对照组,提示Dex虽然可以使哮喘大鼠TLR7基因水平有效降低,但不能使之降至正常水平。3.NF-κB与TLR7mRNA变化趋势相同的结果,提示TLR7在哮喘中的作用可能通过NF-κB介导。