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目的:宫颈癌是全球妇女中最常见的恶性肿瘤之一,占女性生殖器官恶性肿瘤的首位。宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)发展至宫颈癌需经历很长一段时间,晚期及复发转移病例预后差。近年来宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的发病率有上升趋势,尤其是年轻宫颈癌的发病率明显升高。普遍认为HPV癌蛋白(E6、E7)在宫颈癌的发生发展中起主要作用。高危型HPV16编码的E6蛋白与P53蛋白结合,使其失活,导致细胞增殖。E7蛋白可致细胞过度生长。E6可增加E7基因转化上皮细胞的能力。但研究表明单一HPV感染不足以形成CIN或宫颈癌,不能忽视其他协同因素。环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)是20世纪90年代发现的一种与多种肿瘤的发生发展密切相关的酶。给予特异性COX-2抑制剂可降低某些肿瘤的发病。研究表明,COX-2表达上调及HPV感染都是宫颈癌发病的早期事件。本实验以免疫组化方法检测了HPV16-E6蛋白及COX-2在宫颈慢性炎、CIN、浸润癌各组中的表达情况及二者的相关性,以及二者与宫颈癌年龄、分期、分化等临床病理参数之间的关系。探讨HPV16-E6、COX-2在宫颈癌发生发展及侵袭转移中的作用,为COX-2抑制剂和HPV疫苗在宫颈癌防治中的治疗应用提供有力的理论依据和实验基础。方法:本研究标本取自河北医科大学第四医院2004年6月-2006年6月间就诊于妇科、初诊的宫颈癌患者45例,术后均经病理确诊,病历资料完整。其中鳞癌36例,腺癌6例,腺鳞癌及透明细胞癌3例。根据国际妇产科联盟(FIGO,2000)标准分期:Ⅰ期25例,Ⅱ期17例,Ⅲ期3例。选择同期因妇科良性疾病手术治疗或门诊治疗患者的正常宫颈组织21例,宫颈慢性炎症73例,CIN26例。病历资料完整。所有标本于离体半小时内取材,以10%中性甲醛固定,石蜡包埋,切片备用。应用免疫组化S-P法检测COX-2和HPV16-E6蛋白在不同宫颈病变组织中的表达情况及其与宫颈癌临床病理特征之间的关系,分析二者之间的相关性。应用SAS8.1统计软件包处理数据,采用Χ2检验、确切概率法、多个样本率比较的Χ2分割法、Spearman等级相关法进行统计分析。结果:1 COX-2在不同宫颈病变组织中的表达:在正常宫颈、宫颈炎、CIN、宫颈癌各组中,COX-2的阳性表达率分别为0%、36.99%、38.46%、64.44%,四组比较差异有统计学意义(Χ2=25.50,P<0.0001)。经Χ2分割后比较(α′=0.008333),宫颈癌组的阳性率明显高于宫颈炎组及正常宫颈组,有显著性差异(分别为Χ2=8.42, P=0.0037;Χ2=24.14, P<0.0001)。CIN组明显高与正常宫颈组,有显著性差异(Χ2=8.09,P=0.0044)。宫颈炎组明显高于正常宫颈组,有显著性差异(Χ2=10.89,P=0.001)。2 HPV16-E6蛋白在不同宫颈病变组织中的表达:在正常宫颈、宫颈炎、CIN、宫颈癌各组中,HPV16-E6蛋白的阳性表达率分别为0.5%、38.35%、46.15%、71.11%,四组比较差异有统计学意义(Χ2=27.50, P<0.0001)。经Χ2分割后比较(α′=0.008333),宫颈癌组的阳性率明显高于宫颈炎组及正常宫颈组,有显著性差异(分别为Χ2=11.95, P=0.0005;Χ2=25.21, P<0.0001)。CIN组明显高与正常宫颈组,有显著性差异(Χ2=9.95, P=0.0016)。宫颈炎组明显高于正常宫颈组,有显著性差异(Χ2=8.63, P=0.0033)。3 COX-2的表达与宫颈癌临床病理参数之间的关系:COX-2的阳性表达率在<45岁和≥45岁患者中分别为57.69%、73.68%,二者相比无显著性差异(Χ2=1.22,P>0.05);在鳞癌、腺癌及其他病理类型中分别为67.65%、62.5%、33.3%,三者相比无显著性差异(Χ2=1.43,P>0.05);在高分化、中分化、低分化组织中分别为75.0%、65.0%、53.85%,三者相比无显著性差异(Χ2=1.22,P>0.05);在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期中分别为60.0%、70.59%、66.67%,三者相比无显著性差异(Χ2=0.05,P>0.05);肿瘤直径<4cm和≥4cm分别为68.75%、53.85%,二者相比无显著性差异(Χ2=0.36,P>0.05);有淋巴结转移和无淋巴结转移者分别为85.0%、48.0%,二者相比有显著性差异(Χ2=6.63,P<0.05);有宫旁或脉管浸润与无宫旁或脉管浸润的组织中分别为78.95%、53.85%,二者相比有显著性差异(Χ2=4.60,P<0.05);浅肌层和深肌层浸润分别为50.0%、84.21%,二者相比有显著性差异(Χ2=5.60,P<0.05)。4 HPV16-E6蛋白的表达与宫颈癌临床病理参数之间的关系:阳性表达率在高分化、中分化、低分化组织中分别为83.33%、70.0%、61.54%,三者相比无显著性差异(Χ2=1.46,P>0.05);在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期中分别为68.0%、76.47%、66.67%,三者相比无显著性差异(Χ2=0.39,P>0.05);有淋巴结转移和无淋巴结转移者分别为65.0%、76.0%,二者相比无显著性差异(Χ2=0.65,P>0.05);肿瘤直径<4cm和≥4cm分别为78.13%、53.85%,二者相比无显著性差异(Χ2=1.60,P>0.05);浅肌层和深肌层浸润分别为69.23%、73.68%,二者相比无显著性差异(Χ2=0.11,P>0.05);在<45岁和≥45岁患者中分别为57.65%、89.47%,二者相比有显著性差异(Χ2=5.39,P<0.05);在鳞癌与非鳞癌中分别为88.24%、18.18%,二者相比有显著性差异(Χ2=16.59,P<0.05);有宫旁或脉管浸润与无宫旁或脉管浸润的组织中分别为89.47%、57.69%,二者相比有显著性差异(Χ2=5.40,P<0.05)。5 COX-2和HPV16-E6蛋白在不同宫颈病变组织中表达的相关性:在宫颈炎组、宫颈癌组,COX-2和HPV16-E6蛋白的表达均呈正相关关系,等级相关系数rs及P值分别为(rs=0.7794, P<0.01),(rs=0.6014, P<0.01)。结论:1 COX-2和HPV16-E6蛋白在宫颈癌组织中的阳性表达率明显高于慢性宫颈炎组及正常宫颈组,表明COX-2和HPV16-E6蛋白与宫颈癌的发生发展及恶性生物学行为密切相关。CIN及宫颈炎组织中的阳性表达率明显高于正常宫颈组,表明在宫颈癌变发生早期即有COX-2和HPV16-E6蛋白水平的升高,提示:COX-2和HPV16-E6蛋白表达上调是宫颈癌发病的早期事件,检测二者在宫颈组织中的表达有助于早期诊断宫颈癌前病变及早期浸润癌。2 COX-2和HPV16-E6蛋白与宫颈癌临床病理参数之间的关系:COX-2与宫颈癌发病年龄、病理类型、分化程度、分期、肿瘤直径无关,而与淋巴结转移、宫旁或脉管浸润及浸润深度有关。HPV16-E6蛋白与宫颈癌发病年龄、病理类型、宫旁或脉管浸润有关,而与组织分化程度、分期、淋巴结转移、肿瘤直径及浸润深度无关。表明:COX-2在宫颈癌发生发展及演进整个过程均发挥作用,检测COX-2还可作为反映宫颈癌恶性程度及侵袭转移能力的指标。高危型HPV16感染引起的宫颈癌多发生在年龄较大人群(≥45岁),且与宫颈鳞癌的关系较其他病理类型更加密切。HPV16在宫颈癌的侵袭转移中可能发挥一定作用。3对宫颈病变组织中COX-2和HPV16-E6蛋白表达进行相关性分析,结果表明:在宫颈炎及宫颈癌组织中二者表达均呈正相关关系。提示:在宫颈癌前病变早期,COX-2和HPV16即相互作用,促进细胞恶性转化,导致宫颈病变的进展。而浸润癌阶段,二者在肿瘤的侵袭转移发面可能发挥一定的协同作用。