性传播疾病病原体检测基因芯片研究

来源 :中国人民解放军军事医学科学院 | 被引量 : 1次 | 上传用户:wsptdy
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本课题将基因芯片技术用于性传播疾病病原体诊断与检测研究,制备了以荧光标记多重不对称PCR技术为基础的性传播疾病病原体寡核苷酸检测芯片,实现了淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体三种病原体的同时多样本检测。通过芯片制备工艺条件研究确定制备性传播疾病病原体检测芯片的最佳方案是采用长度40mer,3’端双功能修饰的寡核苷酸探针点制到醛基片上制备芯片。在此基础上,设计并合成了三种病原体以及荧光素酶基因和大豆基因特异的引物和探针序列。以此引物和探针对性病检测芯片优化结果显示:选取点样液A和杂交液B,探针序列靠近荧光标记引物端,探针浓度以50μM,杂交温度以42℃,杂交时间以60min,PCR产物经加热变性后与杂交液以1:2比例制备检测芯片为宜。对该芯片的检测灵敏度进行条件优化表明:在25μl PCR反应体系中,淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体和荧光素酶基因正向引物浓度分别为0. 225μM、0. 135μM、0. 15μM和0. 3μM,反向Cy3标记的荧光标记引物浓度分别为2. 25μM、1. 35μM、1. 5μM和3μM,dNTP为300μM,MgCl2 3mM,KCl 75mM,1×PCR缓冲液和2U Taq酶。PCR扩增条件为:预变性(5 min/94℃);35个循环:变性(30 sec/94℃),退火(30sec/57℃),延伸(30 sec/72℃);延伸:(5 min/72℃)。以此条件进行多重PCR扩增,芯片检测的灵敏度最高,四个基因皆为5×103copies。特异性实验表明芯片对待检病原体特异。对60份临床标本进行淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体检测,芯片检测方法与临床PCR诊断方法的符合率分别为97. 2%、100%和75. 2%。
其他文献
中国营养学亦似医药学那样有传统营养学与现代营养学两大部分,前者是祖国伟大医药宝库的一部分,由几千年医学实践总结而来,古籍中有关食疗与养生的记载均和营养学有关,但其理论基
水利工程在施工中要注意的问题非常的多,为了更好的确保水利工程施工可以顺利的进行,一定要做好水利工程的设计工作,对设计中出现的问题要及时进行处理。这样可以更好的进行水利
提出了一种间歇排出部分产水的循环模式的新型方法,来进行反渗透阻垢剂的性能评价,并以模拟浓水作为进料水,在不同操作条件下,对新研制的环保型阻垢剂TJ-1、TJ-2阻碳酸钙性能
主要探讨了农田信息系统数据库、用户界面及各功能模块的设计原理和设计方法.在数据库的设计中,把农田空间数据、属性数据、分析模型和专家系统有机地结合在一起,使数据的管
慢性荨麻疹(CU)是一种常见的变态反应性疾病,该病发病率高,常迁延不愈。给病人的工作和生活带来许多不便和负面影响,也加重了社会经济负担。其中,能够除外明显的物理因素、食物、
ue*M#’#dkB4##8#”专利申请号:00109“7公开号:1278062申请日:00.06.23公开日:00.12.27申请人地址:(100084川C京市海淀区清华园申请人:清华大学发明人:隋森芳文摘:本发明属于生物技
<正>2009年12月初,全国15家主流媒体联合评选十大网络事件。从评选出来的十大网络事件中,不少事件的发展都离不开网友的关注和推动。正是在网络言论开放的平台上,正是在网友
对于需要进行整体结构分析的桥梁,必须考虑桥梁基桩的作用.桥梁基桩与土的相互作用直接影响到桥梁下部结构的抗推刚度,特别是布置了固定支座或者单向活动支座的弯梁桥,能否正
由中国科技情报学会竞争情报分会主办的"中国竞争情报年会"是情报和信息领域分享学术研究成果、交流竞争情报实践的盛会,已成为业界品牌,吸引了情报和信息界、咨询界及企业界的
目的探讨硫酸铜法检测血红蛋白在献血筛查中的实际应用效果。方法应用硫酸铜和血细胞计数仪对1238名献血者筛查标本进行检测,以血细胞计数仪法为参考计算硫酸铜法的灵敏度、