枳(Poncirus trifoliata(L.)Raf.)是重要的柑橘砧木,具有较强的抗寒性,故常作为抗寒研究的重要材料。AP2/ERF是植物系统特有的一类转录因子大家族,越来越多的研究表明该家族的一些成员参与了植物生长发育、病菌防御以及非生物胁迫在内的多种生物学过程,但大部分成员的功能却并不清晰。本文以实验室克隆的PtrERF36基因为研究对象,旨在揭示该基因在枳抗寒中的功能和初步抗寒机制,主要研究结果如下:1、构建PtrERF36-RNAi载体,通过根癌农杆菌介导法转化,获得了202棵枳再生植株,PCR鉴定出29株阳性转基因株系,阳性转化率为14.36%,对6个PtrERF36干涉株系的表达量进行分析,发现干涉株系的表达量不同程度地低于野生型,其中#47、#56株系抑制程度最为明显。2、对野生型和干涉株系#47、#56进行抗寒性分析,结果表明0℃处理12 h后,干涉系植株受到更为严重的伤害,电导率、MDA及活性氧(H2O2和O2-)含量均高于野生型。POD、SOD酶活性低于野生型。上述结果表明PtrERF36被抑制后使枳的抗寒性减弱,推测PtrERF36可能在枳的抗寒性中起着正调控的作用。3、qRT-PCR分析枳PtrERF36-RNAi系中胁迫相关基因的表达量,发现正常生长条件下,干涉系中POD、CAT、SOD、COR15以及ICE1等基因的表达水平均低于野生型。低温处理后上述基因表达量有所增加,但干涉系仍低于野生型。其中POD下调最为明显,分析POD基因的启动子发现上面含有能与ERF类转录因子结合的GCC-box,推测POD可能与PtrERF36有直接的调控关系。4、以野生型枳的DNA为模板,PCR克隆获得PtrERF36的启动子序列,测序后分析表明,PtrERF36启动子序列含有ABRE、DRE/CRT等与胁迫应答相关的顺式作用元件。