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蛇毒神经毒素,是自蛇毒中分离的蛋白组分,具有中枢镇痛活性。由于其种类众多,不同种类的神经毒素具有不同的机体作用机制,同时由于其无法透过血脑屏障,导致中枢镇痛效果不佳。本实验以江西产中华眼镜蛇粗毒为原料,分离纯化获得神经毒素,并对其进行了镇痛作用机制和制剂学的研究,主要研究方法和结果如下:(1)通过CM-琼脂糖凝胶CL-6B阳离子交换柱和Sephadex G-50凝胶过滤两次柱层析分离提纯粗毒,用HPLC法跟踪鉴定目标产物,获得较高纯度的神经毒素,并计算蛇毒神经毒素的总提取率为9.5%。该步骤操作过程简单,重现性好。(2)利用分离纯化获得的神经毒素,进一步通过小鼠脊髓损伤模型,研究其缓解神经病理性疼痛的可能分子机制。实验以小鼠脊髓损伤模型为中枢神经病理性疼痛模型,利用试剂盒研究相关信号分子的含量变化,以及利用Western bloting法验证其受体和通路假说。由实验结果可以看出,脑组织中ATP含量、ROS含量及MAPK ERK1/2酶的表达水平均有明显变化,表明神经毒素可能直接或间接地影响通相关酶或者信号分子的表达。结合现有研究成果,神经毒素能够发挥一定程度的镇痛作用,极有可能与脑内常见的腺苷受体相关联,达到协同镇痛的效果。(3)以溶菌酶为模型药物,探索光响应纳米微囊及脂质体的制备较优条件。将分离纯化获得的神经毒素制备出光响应蛇神经毒素PLGA和PEG-PLGA纳米微囊,包封率分别为25.1%和22.3%,载药量分别为3.30%和3.09%,粒径为800~1200 nm。650 nm光照30 min的体外释放曲线表明其具有较好的光控释放性能和缓控释性。另外,将神经毒素制备出光响应蛇神经毒素脂质体,包封率25.5%,载药量为3.8%,粒径为225.59±0.49 nm,电位为-53.50±3.25 mV。此方法制备出的脂质体具有良好的重新性和稳定性。在热板法镇痛实验中,与原料药的镇痛效果相比,该脂质体显示良好的光控释放药物性能,显著改善药物的镇痛效果。本论文创新地提出了蛇毒神经毒素作用于腺苷受体途径,并制备了红光光响应纳米制剂,实现了蛇毒神经毒素的光控释。