模拟高原缺氧大鼠骨髓细胞EPOR的研究

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目的:高原缺氧时红细胞增多,红细胞适度增多可以改善组织供氧,是缺氧习服-适应的重要机制之一。EPO是体内调节红细胞生成的最重要的糖蛋白,能刺激红系祖细胞的增殖、分化和成熟。一般认为组织缺氧时EPO分泌增加可能是高原缺氧红细胞增多的原因。本文旨在研究模拟高原缺氧时骨髓细胞EPOR的变化,探讨高原缺氧时红细胞增多的机制。 方法:实验用Wistar大鼠,体重150g-200g,雌雄各半。随机分为4组:常氧对照组和模拟缺氧5天、15天和30天组。模拟缺氧组在低压舱实验室模拟海拔5000米缺氧。每天减压23小时,1小时喂食和打扫卫生。提取大鼠骨髓细胞的总mRNA,用RT-PCR方法检测4组大鼠骨髓细胞EPORmRNA的表达。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,进行密度扫描,并以共同扩增的β-actin蛋白基因作为内参照,二者扩增带密度之比表示EPORmRNA表达水平。用125I-EPO与骨髓密度分离细胞(ρ<1.077g/ml)进行放射性配体受体结合实验,测定各组大鼠骨髓细胞表面EPOR的数量和亲和力的变化。同时用瑞氏染色观察了各组大鼠骨髓像。 结果:1.缺氧5天,15天大鼠骨髓细胞EPOR基因表达水平显著高于对照组,缺氧30天则接近了对照水平。2.缺氧5天的大鼠骨髓有核细胞EPOR亲和力是升高的,而缺氧15天和30天大鼠的骨髓有核细胞EPOR亲和力是减小的。EPOR的数量在整个缺氧过程中呈现增高的趋势。3.骨髓像观察到缺氧5天大鼠骨髓红系计数比例高于对照,缺氧15天和30天骨髓淋巴系计数比例高于对照,缺氧30天骨髓粒系计数比例低于对照。 结论: 1.缺氧可调节大鼠骨髓细胞EPORmRNA的表达,缺氧5天与缺氧15天大鼠骨髓细胞 EPOR mRNA的表达与对照组相比差异显著,缺氧 30天与对照组无显著性差异。 2.骨髓细胞表达高亲和力的EPOR(Kd值为2960PM),缺氧5天的大鼠骨髓有核细胞 EPOR亲和力是升高的,而缺氧 15天和 30天大鼠的骨髓有核细胞EPOR亲和力是减小的。EPOR的数量在整个缺氧过程中呈现增高的趋势。测得的细胞表面EPOR数目与EPOR mRNA表达量在高原缺氧过程中的变化是相似。EPO-EPOR系统是参与调节红细胞生成的最主要因子,高原缺氧后期红细胞的增多可能有其他因素的参与。 3.缺氧对大鼠骨髓像的影响并不仅限于红系,其对粒系和淋巴系比例的改变也有影响。缺氧还影响了骨髓细胞的形态。这些可能是组织对缺氧过程的适应性改变。
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