柴胡三参胶囊含药血清对P38MAPK通路介导BMSCs向心肌细胞分化的干预研究

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目的研究柴胡三参胶囊含药血清干预骨髓间充质干细胞在P38MAPK通路向心肌细胞分化的干预作用,观察干细胞增殖分化情况,检测P38MAPK蛋白、心肌转录因子MEF2C、心肌特性标志物CTn T在分化过程中的表达,佐证柴胡三参胶囊含药血清对干细胞向心肌细胞分化的干预作用,为中药柴胡三参胶囊的临床广泛应用奠定理论基础及提供更多的实验依据。方法第一部分:SPF级健康大鼠20只,雌雄各半随机分为2组,每组各10只,取1组为空白血清组,1组为含药血清组,予以基础饲料喂养20d,第21d开始灌胃,含药血清组予以柴胡三参胶囊灌胃,空白血清组给予等量的生理盐水灌胃,第28d末次给药1小时后经腹主动脉取血,离心血清,制作出含药血清和空白血清。P1代骨髓间充质干细胞株进行复苏培养,传代至P3代,以不同浓度比例加入柴胡三参胶囊含药血清,与空白对照组相比,MTT法进行柴胡三参胶囊最佳给药浓度和与给药时间的筛选,测得干细胞增殖情况。第二部分:根据不同处理因素将骨髓间充质干细胞分为4组:空白对照组、BMP-2诱导剂组、柴胡三参胶囊含药血清+BMP-2诱导剂组、柴胡三参胶囊含药血清组,分别加入空白血清、BMP-2、柴胡三参胶囊含药血清+BMP-2及柴胡三参胶囊含药血清,用Westernblotting法检测各组内P38MAPK蛋白表达水平,PT-PCR法检测干预后各组中MEF2C、CTn T表达。结果MTT法结果显示:以柴胡三参胶囊含药血清20%的浓度干预24h后,可见大量密集的BMSCs悬浮或沉积于培养皿底壁,在含药血清20%浓度时增殖最多,于诱导24h后达到最大密度。Westernblotting法结果显示:与其他各组对照,柴胡三参胶囊+BMP组P38MAPKm RNA及蛋白表达均上调(P<0.01);以最佳浓度即20%的含药血浆给予柴胡三参胶囊+BMP组、柴胡三参胶囊组干预后,空白组、BMP组、柴胡三参胶囊组P38MAPKm RNA及蛋白表达较柴三+BMP组均见下调(P<0.05或P<0.01),而空白组蛋白表达与其他组比较均无统计学意义。PCR结果显示:诱导后BMP-2组、BMP-2+含药血清组、含药血清组MEF2C及CTn T表达水平均高于空白血清组,差异有统计学意义(P<0.01);BMP-2+含药血清组表达水平高于BMP-2组、含药血清组(P<0.05);BMP-2组与含药血清组比较,差异无统计学意义。(P>0.05)结论柴胡三参胶囊含药血清在一定条件下能促进骨髓间充质干细胞的增殖,对P38MAPK通路介导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌细胞分化具有一定的促进作用。
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