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第一部分，针对miRNA-10b海绵抗乳腺癌实验性研究 [目的]： 1.尝试针对miRNA-10b设计Sponge。 2.明确miRNA-10b Sponge在乳腺癌（高转移细胞株MDA-MB-231和低转移MCF-7）中，对miRNA-10b表达水平及靶蛋白HOXD-10表达的影响，以确定抗miRNA-10b Spong发挥作用的机制。 3.研究miRNA-10 Sponge对MDA-MB-231和MCF-7增殖和克隆形成能力的影响。 4.观察miRNA-10b Sponge对高转移细胞株MDA-MB-231侵袭迁移能力的影响。 [方法]： 1.miRNA-10b Sponge和miRNA-10b过表达载体的构建:miRNA-10b Sponge的根据文献设计原则，及结合miRBase数据库（http://www.mirbase.org）所提供的序列信息，交由公司进行设计合成。 2.脂质体转染技术:脂质体Lipofectamine2000介导的转染技术，将miRNA-10b Sponge载体和miRNA-10b过表达载体分别转入乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中，并用Real-time PCR验证转染后前后miRNA-10b的表达量。 3.CCK-8试剂盒检测细胞增殖:应用CCK-8试剂盒检测转染miRNA-10bSponge载体和miRNA-10b过表达载体后的乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的存活率，分析两株乳腺癌细胞增殖能力的改变。 4.细胞伤口愈合实验:瞬时转染miRNA-10b Sponge载体和miRNA-10b过表达载体分别转入乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231后，在单细胞层的中间划“十”，在不同的时间点测量划痕宽度，分析处理因素对乳腺癌迁移细胞迁移能力的影响。 5.细胞侵袭能力的检测:在miRNA-10b Sponge处理和miRNA-10b过表达的状态下，用Transwell实验分析其对乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭活性的影响。 6.Western Bloting:用于检测转染了miRNA-10b Sponge和miRNA-10b过表达不同质粒载体之后，miRNA-10b靶基因HOXD-10蛋白的表达水平的变化。 [结果]： 1.在MDA-MB-231和MCF-7细胞中，瞬时转染miRNA-10b Sponge对miRNA-10a表达的影响。 (1)在MDA-MB-231中，与miRNA-10bNC组比较，转染miRNA-10b Sponge组的miRNA-10a表达水平至降低对照组的34％，且P＜0.05。 (2)在MCF-7中，与miRNA-10bNC组比较，转染miRNA-10b Sponge组的miRNA-10a表达水平至降低对照组的19.2％，且P＜0.05。 2.在MDA-MB-231和MCF-7细胞中，miRNA-10b及HOXD-10蛋白、mRNA的表达水平差异。 (1)与MCF-7比，MDA-MB-231中miRNA-10b表达水平是其1.23倍。 (2)与MCF-7比，MDA-MB-231中HOXD-10蛋白灰度值是其67.6％，HOXD-10 mRNA是其2.23倍，且P＜0.05。 3.在MDA-MB-231和MCF-7细胞中，瞬时转染miRNA-10b Sponge及miRNA-10b后对miRNA-10b及HOXD-10蛋白、HOXD-10 mRNA的表达水平影响。 (1)在MDA-MB-231细胞中，与miRNA-10bNC组比较，miRNA-10b Sponge组miRNA-10b表达量下降了50％，HOXD-10蛋白、HOXD-10mRNA分别上调至其1.3倍、16.9倍;miRNA-10b组miRNA-10b表达量上调至其8.1倍，HOXD-10蛋白、HOXD-10 mRNA表达量分别下调51.3％，4.5％，且P＜0.05。 (2)在MCF-7细胞中，与miRNA-10b NC组比较，miRNA-10b Sponge组miRNA-10b、HOXD-10蛋白、HOXD-10mRNA表达量无统计学意义;miRNA-10b组miRNA-10b表达量上调至其17倍，HOXD-10蛋白、HOXD-10mRNA表达量分别20.2％，16.8％，且P＜0.05。 4.在MDA-MB-231和MCF-7细胞中，瞬时转染miRNA-10b Sponge及miRNA-10b后对增殖、克隆形成能力的影响。 (1)在MDA-MB-231细胞中，miRNA-10b NC组比较，miRNA-10b Sponge组72h时存活率下调78.8％，miRNA-10b组存活率上调至其1.2倍，且P＜0.05;在MCF-7细胞中，miRNA-10b Sponge组和miRNA-10b组对细胞存活率无明显影响。 (2)在MDA-MB-231细胞中，miRNA-10b NC组比较，miRNA-10b Sponge组克隆形成率下降42.8％; miRNA-10b组克隆形成率是其1.5倍，且P＜0.05;在MCF-7细胞中miRNA-10b Sponge组和miRNA-10b组对细胞克隆形成率无明显影响。 5.在MDA-MB-231和MCF-7细胞中，瞬时转染miRNA-10b Sponge及miRNA-10b后对侵袭，迁移形成能力的影响 (1)在MDA-MB-231细胞中，miRNA-10bNC组比较，miRNA-10b Sponge组侵袭细胞数下调了61.2％，miRNA-10b组侵袭细胞数上调至其1.84倍，且P＜0.05。 (2)在MDA-MB-231细胞中，miRNA-10b NC组比较，24h时miRNA-10bSponge组愈合面积无统计学意义，miRNA-10b组愈合面积上调至其1.3倍;48h时，miRNA-10b Sponge组愈合面积下调了68.8％，miRNA-10b组愈合面积上调至其1.5倍，且P＜0.05。 (3)在MCF-7细胞中，miRNA-10bNC组比较，24h时miRNA-10b Sponge组愈合面积无统计学意义，miRNA-10b组愈合面积上调至其2.7倍;48h时，miRNA-10b Sponge组愈合面积下降了56.8％，miRNA-10b组愈合面积上调至其1.6倍。 [结论]： 1.miRNA-10b Sponge可抑制MDA-MB-231和MCF-7细胞中miRNA-10a的表达，miRNA-10a与miRNA-10b表达存在交叉反应。 2.miRNA-10b在高转移细胞系MDA-MB-231中高表达，在低转移细胞系MCF-7中低表达。 3.miRNA-10b Sponge真核表达载体可有效的抑制MDA-MB-231和MCF-7细胞中miRNA-10b的表达，提高HOXD-10的蛋白及mRNA表达水平，而对MCF-7细胞中HOXD-10的蛋白及mRNA水平无影响。 4.miRNA-10b Sponge抑制MDA-MB-231细胞的克隆增殖能力。 5.miRNA-10b Sponge可明显的降低MDA-MB-231和MCF-7细胞的迁移能力。 第二部分，针对CXCR4融合多肽抗肿瘤转移实验性动物治疗研究 [目的]： 1.分析融合多肽TAT-DV1-BH3对荷瘤裸鼠肿瘤生长体积以及肿瘤重量是否具有抑制作用。 2.明确融合多肽TAT-DV1-BH3在荷瘤裸鼠体内分布是否具有靶向性。 3.观察融合多肽TAT-DV1-BH3是否对荷瘤裸鼠异位移植瘤的远处器官转移具有抑制作用。 [方法]： 1.四组裸鼠分别给予PBS、DV1-BH3、TAT-DV1和TAT-DV1-BH3治疗，从给予裸鼠多肽治疗的第一天开始，每隔一天测量一次肿瘤的大小并计算体积，第23天后，处死裸鼠，剥离肿瘤，称量肿瘤质量，分析融合多肽TAT-DV1-BH3荷瘤裸鼠肿瘤体积以及肿瘤质量是否具有抑制作用。 2.四组裸鼠分别给予PBS、DV1-BH3、TAT-DV1和TAT-DV1-BH3，利用小动物活体成像技术观察多肽在荷瘤裸鼠体内分布是否具有靶向性。 3.将治疗结束的四组荷瘤裸鼠处死，分别取出每组的肝脏，固定、制片、HE染色，镜下观察融合多肽TAT-DV1-BH3是否对荷瘤裸鼠异位移植瘤的远处器官转移具有抑制作用。 [结果]： 1.在23天实验过程中，从第一次给药的15天后，除了第17天，其余的各天TAT-DV1-BH3治疗组与其他三组进行比较，肿瘤的体积较小，P＜0.05，差异有显著性;在治疗后的第23天后处死裸鼠，取出肿瘤称重，TAT-DV1-BH3治疗组与对照组比，体重明显小于其他三组，P＜0.05，融合多肽TAT-DV1-BH3具有明显抑制肿瘤生长的效果。 2.从尾静脉将多肽注射到荷瘤裸鼠体内，观察到TAT-DV1-BH3组在肿瘤处大量聚集绿色荧光，而TAT-DV1和DV1-BH3在瘤块区也有聚集少量的绿色荧光，而对照PBS组无绿色荧光出现，结果表明多肽在裸鼠体内的肿瘤具有特异性的靶向性 3.切片HE染色结果确认融合多肽TAT-DV1-BH3组肝脏转移瘤灶比其他三组少。 [结论]： 1.融合多肽TAT-DV1-BH3具有明显抑制肿瘤生长的作用，两条多肽DV1-BH3和DV1-TAT都不具有抑制肿瘤生长的效果。 2.多肽在裸鼠体内的肿瘤具有特异性的靶向性。 3.TAT-DV1-BH3融合多肽具有抗肿瘤转移的功能，对照多肽DV1-BH3、DV1-TAT则不具备。