【摘 要】
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目的研究表观遗传修饰在胰岛分化及其相关基因(Pdx-1、Pax4、MafA和Nkx6.1)转录表达的作用。方法培养及收集小鼠胚胎干细胞(mES)(1×107)、小鼠成纤维细胞株NIH3T3细胞(1×10
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目的研究表观遗传修饰在胰岛分化及其相关基因(Pdx-1、Pax4、MafA和Nkx6.1)转录表达的作用。方法培养及收集小鼠胚胎干细胞(mES)(1×107)、小鼠成纤维细胞株NIH3T3细胞(1×107)和小鼠胰岛素瘤细胞株NIT-1细胞(1×107)三种细胞,采用甲基化DNA免疫共沉淀-实时定量PCR法(MeDIP-qPCR)检测3种细胞中与胰岛分化相关的基因、0ct4基因和MLH1基因的转录起始区DNA甲基化水平,采用染色质免疫共沉淀-实时定量PCR法(ChIP-qPCR)检测上述三种细胞各基因转录起始区组蛋白修饰(H3乙酰化、H3K4m3和H3K9m3修饰)的状况,同时采用实时定量RT-PCR检测上述三种细胞各基因mRNA表达水平,分析DNA甲基化、H3乙酰化、H3K4m3和H3K9m3修饰改变与基因表达之间的关系。结果(1)NIH3T3细胞Pdx-1、MafA和Nkx6.1基因转录起始区呈高甲基化,与mES和NIT-1细胞相比均明显增高(P<0.05),与基因表达存在负相关；(2)NIT-1细胞中Pdx-1、Pax4、MafA、Nkx6.1等基因转录起始区的H3K4m的修饰水平较mES和NIH3T3细胞明显增高(P<0.05),基因表达。(3)NIH3T3细胞中Pdx-1、Pax4、MafA、Nkx6.1等基因转录起始区的H3K9m3的修饰水平较mES和NIT-1细胞明显增高(P<0.05),基因不表达。结论组蛋白修饰(H3K4m3和H3K9m3)及DNA甲基化能相互协调,共同参与了Pdx-1、MafA、Nkx6.1和Pax4等与胰岛分化相关的基因的表达调控,对胚胎干细胞向胰岛分化具有重要的意义。
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