【摘 要】
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RNA干扰(RNAi，RNA interference)是dsRNA介导的特异性基因表达沉默现象，为了探讨RNAi抑制家蚕核型多角体病毒(BmNPV)增殖的效果，用带有lef-1dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-LEF-N
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RNA干扰(RNAi，RNA interference)是dsRNA介导的特异性基因表达沉默现象，为了探讨RNAi抑制家蚕核型多角体病毒(BmNPV)增殖的效果，用带有lef-1dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo转染家蚕BmN培养细胞，通过G418(750-800μg/mL)筛选，获得了稳定转化细胞系。病毒感染试验显示，稳定转化细胞的病毒感染率比正常细胞低53％，转化细胞形成的多角体数量大约为普通细胞中的2/3，细胞培养上清中的游离病毒减少了10-20倍，表明病毒在转化细胞中的增殖受到明显抑制；半定量RT-PCR结果显示，转化细胞中病毒lef-1的转录水平仅为正常细胞的2/5-3/5，表明转化细胞表达的lef-1 dsRNA抑制了病毒lef-1基因的表达。通过反向PCR分析外源DNA片段插入基因组位点，结果显示：在转化细胞中，外源DNA可通过随机整合或按照piggyBac特定的转座位点TTAA插入细胞基因组。通过精子介导和基因枪轰击的组合处理，将pigA3-LEF-Neo转基因载体导入蚕卵，在自然无防病措施的情况下饲养，通过neo和gfp的双重筛选，最终存活的5头蚕蛹均呈现出不同荧光强度；PCR鉴定结果证实，所获得荧光家蚕为；初步筛选结果显示，GO代的荧光家蚕对BmNPV有较强的抗性。GO代的荧光蚕通过组合杂交，获得4种类型的G1代转基因家蚕，为最终获得抗BmNPV的转基因家蚕奠定了基础。
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