Bt高抗紫外突变株的筛选及其漂浮缓释剂分析优化

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:haoliu1988
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苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)是一种革兰氏阳性细菌,能够在形成芽胞的同时产生伴孢晶体,对多个目的昆虫具有特异杀虫活性,由于对人畜无毒、不污染环境、不产生抗药性等优点,是目前世界上研究最深入、应用最广泛的微生物杀虫剂。然而,Bt在使用过程中易受到紫外线的影响而减短持效期,从而使紫外成为Bt制剂应用受限的主要原因之一。因此,提高Bt对紫外线辐射的抵御能力对Bt发展应用具有十分重要的应用价值。本文以高效杀蚊Bt菌株LLP29为研究对象,利用紫外光照射筛选高抗紫外突变株,并对其胶囊化漂浮缓释剂配方进行分析优化,以期获得活性高持效久的Bt新产品。利用紫外光照射本实验室高效杀蚊Bt菌株LLP29直接诱变筛选高抗紫外突变株,在经过20轮次紫外光照射反复诱变后,筛选到能够抗67min紫外线辐射且毒力达95.00%的突变株LLP29-M19。对LLP29-M19进行形态学、质粒图谱、蛋白图谱和生理生化生物学分析,结果发现突变株在形态学、质粒图谱和蛋白图谱上并没有显著变化,而生理生化主要差异体现在对于果糖、葡萄糖、木糖、蕈糖、厌氧葡萄糖的利用、赖氨酸反应及麦康凯反应试验上。这种通过Bt菌株自身来提高其抵抗紫外的能力,安全有效又可避免外在添加物对Bt的影响,同时,具有显著的生态效应和经济效应。对LLP29-M19进行细胞固定化胶囊化,应用快速有效的数学统计方法对其胶囊化漂浮缓释剂配方进行分析优化。通过单因素筛选确定最佳海藻酸钠浓度为1%,最佳CaCl2浓度为2%,最佳空心玻璃微珠浓度为3.5%;采用二水平Plackett-Burman设计对影响缓释杀蚊毒力效果和漂浮效果的8因素进行显著性筛选,获得漂浮缓释剂配方中3个重要影响因子为:CaCl2、海藻酸钠和空心玻璃微珠;运用最陡爬坡试验法测试这3种因子,获得这3种重要因子的最适浓度范围为CaCl24.0%海藻酸钠0.8%和空心玻璃微珠2.7%;通过响应面分析获到这3个重要因子的交互作用与最佳条件,确定LLP29-M19最佳漂浮缓释剂配方为:海藻酸钠0.78%、CaCl24.52%、空心玻璃微珠3.12%、菌粉3.0%、黑色素0.015%、苯甲酸钠0.2%、小白鼠饲料0.5%、固定化时间4.5h。优化模型验证的结果表明,剂型的缓释杀蚊毒力效果为2391.67,漂浮效果为1698.25,试验值与模型计算值误差分别只相差5%和1.8%,说明了优化模型有效性。优化后剂型缓释杀蚊毒力和漂浮性分别是基础配方的6.07倍和25.32倍,这将具有广阔的应用前景。本研究还为使用数学统计方法优化生物农药Bt制剂配方和开发应用奠定了理论基础。
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