论文部分内容阅读
背景肝衰竭是由于各种因素导致肝细胞大量坏死而出现的以腹水、黄疸、肝性脑病和凝血机制障碍等为主要表现的一类肝脏疾病，其临床症状复杂，进展迅速，病死率高（约60～70%），预后极差，严重威胁人类健康。目前认为肝衰竭与免疫应答紊乱密切相关。自然杀伤细胞（NK细胞）是重要的先天免疫细胞，在抗病毒反应中具有非常重要的作用，其对靶细胞的杀伤作用无须预先致敏，可在较短时间内即发生杀伤作用。NK细胞不表达CD3和T细胞抗原受体（TCR），主要标记为CD56和（或）CDl6分子。根据其表面CD56和CD16分子是否表达，可将NK细胞分为CD56+、CD56+CD16+和CD16+三个主要亚群，其中CD56是NK细胞分化的特异性标志，而CD16与NK细胞的杀伤活性关系密切。3个NK细胞亚群杀伤活性的强度比较依次为：CD16+＞CD56+CD16+＞CD56+。在我国肝衰竭的主要病因是乙型肝炎病毒感染。乙型肝炎病毒是一种非细胞病变的病毒，因此免疫介导的反应在其发病机制和感染预后方面也具有重要作用。本课题通过流式细胞术分析慢性乙肝肝衰竭及慢性乙型肝炎患者外周血NK细胞各亚群构成比特点，探讨它们在慢性乙肝及肝衰竭发生发展中的作用。本课题来源于湖北省自然科学基金重点项目（编号：2008CDA049）。目的通过研究慢性乙肝肝衰竭和慢性乙肝患者外周血NK细胞亚群分布特点，分析其与患者临床指标之间的关系，探讨其在慢性乙肝及肝衰竭发生发展中的意义。方法本课题将实验对象分为3组，包括慢性乙肝肝衰竭组30例、慢性乙肝组30例和健康对照组25例。收集武汉同济医院感染科2010年9月～2011年5月住院的慢性乙肝患者30例，慢性乙肝肝衰竭患者30例，体检中心正常对照组25例，空腹采集各组静脉抗凝血2ml。记录患者的一般资料（性别、年龄等）。用Ficoll密度梯度法分离每份血标本获得外周血单个核细胞（PBMC），6小时内用荧光抗体CD3-FITC,CD16-PE,CD56-APC抗体染色，采用流式细胞仪检测各实验组外周血NK细胞亚群比例。并于当天检测患者血常规、肝肾功能、凝血常规、HBV-DNA定量，由实验室专人完成，记录检验结果，并计算肝衰竭患者的MELD评分。整理数据，使用SPSS13.0统计学软件进行统计学分析。正态分布数据以x±s表示，多组比较用方差分析，多组组间比较用snq检验。非正态分布数据以中位数M（P25,75）表示，采用非参数检验。相关分析采用Spearman秩相关。以P<0.05为差异有统计学意义。结果正常对照组外周血NK细胞比例为28.50%（18.45%，32.65%），其中CD56+亚群占9.71%（5.02%，13.81%），CD56+CD16+亚群占58.37%（53.42%，66.88%），CD16+亚群占30.74%（4.89%，37.41%）。慢性乙肝肝衰竭组NK细胞比例为22.90%（17.9%，33.58%），其中CD56+亚群占26.7%（19.13%,，4.18%），CD56+CD16+亚群占60.90%（49.38%，69.76%），CD16+亚群占11.16%（4.53%，17.61%）。慢性乙肝组NK细胞比例为33.65%（23.23%，50.95%），其中CD56+亚群占22.49%（9.73%，31.76%），CD56+CD16+亚群占59.75%（49.98%，74.36%），CD16+亚群占15.53%（8.85%，22.06%）。与正常对照组相比，慢性乙肝肝衰竭组及慢性乙肝组CD56+亚群构成比均升高，CD16+亚群构成比均下降，差异有统计学意义（P＜0.01），但CD56+CD16+亚群构成比及NK细胞比例差异无统计学意义（P＞0.05）。慢性乙肝肝衰竭组与慢性乙肝组相比，NK细胞比例下降，差异有统计学意义（P＜0.01）,但NK细胞三个亚群构成比差异均无显著统计学意义（P＞0.05）。慢性乙肝肝衰竭组患者MELD评分平均22.0±7.0分，患者外周血NK细胞CD16+亚群比例与其评分成正相关关系（r=0.444，p=0.016）。结论1、NK细胞亚群构成比失调可能是慢性乙肝和慢性乙肝肝衰竭发病的机制之一。2、NK细胞比例下降可能是慢性乙肝致肝衰竭的驱动因素。3、慢性乙肝肝衰竭患者MELD评分与外周血NK细胞CD16+亚群比例成正相关。