洋铁酸模地上、地下部分多糖提取分离及活性的对比研究

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洋铁酸模(Rumex.pafientia L.)属蓼科,酸模属植物,多年生草本,对环境的适应能力较强,所含活性成分丰富,常被用作传统中药,近年来对于洋铁酸模的报道较少,所以本实验以洋铁酸模为研究对象,对其地上、地下部分的多糖提取工艺,分离纯化,生物活性进行了对比实验探究,旨在为研究洋铁酸模于医疗保健领域的新药开发提供理论依据及参考基础。在对比研究洋铁酸模地上、地下多糖的提取工艺过程中,本实验分别采用水浴法和超声波提取法进行对比分析,最后通过响应面法进行提取条件的优化,以期获得提取含量最大化,优选出适合洋铁酸模多糖提取的最佳工艺。结果表明:洋铁酸模地上部分多糖提取时水浴法提取优于超声法提取,其最优工艺为温度100℃,提取时间2h,料液比(g/v)1:20,洋铁酸模地上部分多糖最高提取率达110.54mg/g;洋铁酸模地下部分多糖提取时超声提取优于水浴提取,其最优提取工艺为提取温度40℃,提取时间20min,料液比(g/v)1:20,洋铁酸模地下部分多糖最高提取率达130.55mg/g,显然洋铁酸模地下部分多糖含量高于其地上部分多糖含量。研究洋铁酸模地上、地下部分多糖的分离纯化过程中,本实验通过水提醇沉法获得洋铁酸模地上、地下部分的粗多糖,利用有机溶剂、D101大孔树脂洗脱对其地上、地下部分的多糖初步除杂、脱蛋白等,并通过DNS法与薄层色谱法鉴定洋铁酸模地上、地下部分的多糖性质,通过DEAE-52离子交换层析柱进行分离洗脱。结果表明:DNS法确定洋铁酸模地上部分为非还原性糖,非还原性糖含量为2.56mg/g,洋铁酸模地下部分为还原性糖,其还原性糖含量为2.94mg/g,其地下部分多糖通过薄层色谱法鉴定其中可能含有果糖,葡萄糖,半乳糖,阿拉伯糖等;DEAE-52柱层析梯度洗脱,其中洋铁酸模地上部分洗脱出的组分记为RLRL-h、RLPL-a、RLPL-b、RLPL-c,含量所占百分比依次为53.33%,12.5%,24%,39.6%;地下部分多糖洗脱出多糖组分,分别记为RLRR-h、RLPR-a、RLPR-b、RLPR-c、RLPR-d,含量所占百分比依次为57.23%、38.35%、17.2%,25.25%、15.24%。为进一步研究其还原性糖成分,通过HPLC法鉴定并建立HPLC检测条件:WondaSil C18硅胶柱,35℃柱温,波长245nm,流速为1mL/min,流动相:乙腈:0.05mol/L磷酸盐缓冲液=2:8,进样量10μL,确定其还原性糖中含有的单糖组分为甘露糖、半乳糖、葡萄糖等。对比研究洋铁酸模地上、地下部分的多糖的抗氧化效果、抗菌活性及抗肿瘤活性,实验选取样品糖溶液与抗坏血酸(Vc)做抗氧化效果对比分析,SPASS17.0数据分析;为研究其抗菌效果,分别选取细菌、真菌等各类菌种,观察不同浓度样品糖溶液对各类菌种的抑制效果;为研究其抗肿瘤活性,将不同浓度的多糖溶液作用于HeLa细胞和DK细胞,观察细胞结构。结果表明:洋铁酸模地上、地下部分多糖提取液均有较强的抑菌效果和抗氧化活性,地上部分的非还原性糖对?OH、O2-、DPPH的清除能力均强于地下部分还原性糖的清除能力,且两种多糖对三种自由基的清除能力呈正相关;观察抑菌效果,对比分析可知洋铁酸模地下部分多糖对枯草芽孢杆菌、酵母菌和红曲霉菌的抑菌强度较强于地上部分多糖,且高浓度的洋铁酸模地下部分多糖溶液对各类菌种的抑制程度均强于其地上部分多糖;观察细胞结构,发现洋铁酸模地上、地下部分多糖对HeLa细胞均有抑制作用,对正常细胞无作用,且地下部分多糖的抑制效果强于地上部分多糖,其地上、地下部分多糖的IC50分别为:54.371?g/mL、38.654?g/mL。
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