1,3-1,4-β-葡聚糖酶（EC3.2.1.73，以下简称为β-葡聚糖酶）是一种重要的工业用酶，广泛的应用于饲料业、酿造业及纺织业。反刍动物瘤胃被认为是目前转化NSP效率最高的生物反应器。其中，由产琥珀酸丝状杆菌（Fibrobacter succinogenes）产生的β-葡聚糖酶在植物细胞壁的降解中起重要作用。但是由于其培养条件要求较苛刻，因此，不能直接利用瘤胃细菌生产工业用酶制剂。本试验以瘤胃纤维降解菌产琥珀酸丝状杆菌β-葡聚糖酶基因为研究对象，从基因密码子优化与表型表达两个方面提高表达量，并且研究了重组酶的性质及体外效果评定的研究，为进一步的生产实践奠定基础。试验选取产琥珀酸丝状杆菌β-葡聚糖酶成熟肽编码区，根据毕赤酵母密码子偏好性对193个碱基进行优化，使GC含量由54%下降至44.2%。通过全基因合成后构造表达载体pPIC9K-GLU（原始）与pPIC9K-GLUm（优化后），并在毕赤酵母GS115中表达。结果显示表达酶活力较优化前提高25.1%，高密度发酵水平下Glucanase modification基因酶活力及比活力分别为34.3U/mL和37.5U/mg，较野生型基因分别提高186.8%和175.2%。同时将所得菌株进行高密度发酵，结果重组183和315菌株表达量分别提高2.7%和135.5%。为了研究不同表型对表达量的影响，试验根据酶切位点不同会产生不同的表型，分别用Sal I和Bgl II酶切载体pPIC9K-GLUm，得到Mut+和Muts两种类型转化子，分别在毕赤酵母中表达，刚果红平板检测显示Mut+型转化子表达量明显高于Muts，且高密度水平下，Mut+型转化子表达酶活力为6424U/mL，大约为Muts表达量的53倍。对GLUm的酶学性质进行了研究，纯化后该酶比活达到10397U/mg。SDS-PAGE该酶相对分子质量处于44.3KD～29KD之间，发酵96h，目的蛋白占总蛋白的87.2%，其最适温度为37℃，最适pH值为5.0。底物特异性分析表明，该酶可水解大麦β-葡聚糖和地衣淀粉，不降解燕麦木聚糖、桦木木聚糖和羧甲基纤维素钠。体外酶解大麦效果较佳，且酶解最佳时间为3h，最佳酶浓度为40U/g。在胃蛋白酶和胰蛋白酶共同作用60min后，仍保留了50.5%的酶活力。因此，该葡聚糖酶作为饲用酶制剂具有潜在的应用价值。