目的：90年代以来,随着分子生物学的迅速发展,肿瘤基因治疗正逐步从实验室进入临床,基因治疗成为肿瘤领域的热点。腺病毒载体被广泛应用于基因治疗和临床试验。然而大多数腺病毒载体尚存在外源基因表达时间短、免疫原性较强、高滴度时有明显的细胞毒性等缺点。肿瘤特异性增殖型腺病毒克服了上述腺病毒载体的不足,能够靶向肿瘤细胞增殖,且病毒本身可杀死肿瘤细胞,而不损害正常细胞,从肿瘤细胞释放出来的病毒可继续感染周围的肿瘤细胞,具有疗效放大的作用。　　 通过新生血管的生成满足其不断生长所需的丰富血供,是实体肿瘤一个重要特征,当直径超过2cm时其生长依赖于新生血管的形成,另外,新生血管生成在肿瘤的转移过程中也起着决定性作用。卵巢癌富含血管,易发生腹腔内转移。抑制肿瘤新生血管生成已成为肿瘤治疗的新方向。在已发现的几种新生血管抑制剂中,以内皮抑素(Endostatin)的作用最为明显,内皮抑素可显著抑制体外血管内皮生长因子(VEGF)诱导的内皮细胞增殖、迁移和血管生成以及实验动物实体肿瘤的生长和转移,长期用药无免疫原性和耐药性等问题发生,同时无论是在动物实验还是在业已结束的Ⅰ期临床试验中都没有明显毒副作用。有资料表明卵巢癌组织内的VEGF表达和微血管密度(MVD)与卵巢癌的复发、转移等生物学行为密切相关。　　 采用内皮抑素纯蛋白直接注射给药法治疗肿瘤所需剂量大,传统生物工程方法表达生产量低,体外活性难于保持,妨碍了内皮抑素的临床应用。基因治疗方法有望解决这一难题。通过增殖缺陷型腺病毒载体介导内皮抑素基因治疗方法在以往研究中已取得了一定效果。但由于对早期增殖缺陷型腺病毒载体的改造出于安全原因考虑,缺失了腺病毒复制所必需的人部分El区基因,同时也就限制了其在肿瘤细胞内的复制和治疗基因的有效表达。因而一个高效的可持续高浓度表达治疗基因的导入载体系统必将对充分发挥内皮抑素抗肿瘤新生血管生成的治疗有着深远意义。同时必需考虑尽可能不侵害正常细胞即基因治疗的靶向性和安全性这一个关键问题。　　 肿瘤特异性溶瘤增殖病毒的出现为肿瘤基因治疗提供了一条新思路。病毒携带的抗癌基因可随病毒在肿瘤细胞内的复制得到高效表达,在肿瘤原发灶及转移灶局部形成高浓度抗癌因子,两者协同作用可进一步提高肿瘤的治疗效果。为卵巢癌的病毒基因治疗、抗新生血管生成基因治疗提供新的思路。　　 方法：携带人内皮抑素基因的增殖缺陷型及增殖型腺病毒载体的构建和制备携带内皮抑素(EN)的腺病毒(Ad)由实验室前期构建。检测mEndostatin体外转染表达及生物学活性。携带hEnd基因的增殖型腺病毒对卵巢癌的体内治疗作用使用BALBIc裸鼠皮下接种人卵巢癌SKOV3细胞株后建立人卵巢癌动物模型,瘤内直接注射病毒治疗。　　 结果：通过蛋白印记分析(Western Blot)证实CK-hE和Ad-hE感染SKOV3细胞后在培养液上清中均可检测到分子量约20kDa的hEndo,表明两种腺病毒载体均可表达分泌型hEndo。CK-hE治疗组肿瘤生长缓慢,自治疗开始后第12天起肿瘤体积已明显小于Ad-hE治疗组(P＜0.05)及PBS对照组(P＜0.01),但没有观察到肿瘤消退或停止生长的理想治疗结果。各项实验进一步阐明了内皮抑素和增殖病毒对卵巢癌协同治疗作用的机理。血管内皮细胞vWF因子免疫组化染色提示CK-hE治疗组肿瘤组织中的微血管数量较Ad-hE治疗组明显减少。　　 结论：本研究通过对携带hEndo基因的增殖缺陷型和增殖型腺病毒载体在体内对卵巢癌治疗作用的比较,证实携带人hEndo基因的增殖型腺病毒载体不仅可在卵巢癌细胞中特异性复制、增殖并杀伤细胞,随病毒复制还可获得高浓度的具有治疗作用生物活性的hEndo,二者协同作用可显著增强对卵巢癌的治疗效果。结果表明,将基因治疗和病毒治疗相结合治疗肿瘤的方法可发挥二者协同优势,疗效明显优于单独的基因治疗或病毒治疗。然而多次瘤内注射CK-hE后并没有观察到肿瘤完全消退或停止生长的理想治疗效果。