石油烃降解菌的驯化分离及降解条件研究

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从天津海滨潮间带取被石油烃严重污染的沉积物样品(含油量0.2 g/g),用柴油为唯一碳源,对其中的石油烃降解菌群进行逐级驯化筛选,以得到高降解能力的石油烃降解菌群。之后,采用选择培养基平板涂布法,对石油烃降解菌群进行分离纯化,得到单株细菌,并对其中两株长势好的石油烃降解菌用16s rDNA测序法进行菌种鉴定,结果表明,这两株菌分别为假单胞菌属和海旋菌属;重点研究了有机N源营养对优势菌群降解柴油的影响,试验确定了能促进生物降解的酵母膏的最适浓度;最后,分别以有机N源酵母膏和无机N源(NH4)2SO4为N源,在30d降解时间内,通过GC-MS测定和分析,对降解菌群降解柴油的情况进行了对比,并对其降解机理进行了初步分析和探讨。实验结果如下:(1)逐级驯化后得到的石油烃降解菌群具有广盐性,适盐浓度在1%~7%的范围内,最适盐度为3.5%,此盐度与海水盐度近似。(2)以酵母膏作为N源,能促进生物降解的降解条件为:酵母膏8.0 g/L,柴油1%,FePO4·4H2O 6.0 mg/L,接种量2%,温度26℃,摇床转速150 rpm,自然pH。(3)通过30d的降解对比实验,结果表明,分别以有机N源酵母膏和无机N源(NH4)2SO4为N源,对柴油的最终降解效果是相同的,但前者的降解时间比后者短10倍多。原因是酵母膏除提供氮源外,还能为细菌提供易利用碳和各种维生素及氨基酸等物质,使细菌在生物降解初期迅速生长和大量繁殖,由于生物量的增加,促使了柴油的快速降解。另外,在生物降解过程中,酵母膏代谢所产生的NH3,成为整个生物降解体系中的缓冲物,稳定降解过程中的pH,将pH维持在微生物喜好的偏碱性环境,使微生物很好地生长和繁殖。因此,与传统的无机氮源相比,酵母膏被证明是生物降解试验中的优势氮源。以酵母膏为N源的降解实验表明,对于浓度≤1%的柴油,3d内可完全降解。
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