乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的一种严重危害人类健康的传染病。乙型肝炎治疗的关键是清除HBV，虽然近年多种抗病毒药物已在临床上用于抑制感染治疗，但治疗效果均不够理想，其原因一是药物本身的抗HBV作用有限；二是药物进入体内后容易扩散，导致在不同组织中相对平均分布，未能在肝脏中形成有效的药物浓度。因此，寻找新的抗病毒药物及给药途径，以进一步提高抗HBV效果实属必要。 乙型肝炎病毒是嗜肝双链DNA病毒，病毒外膜与肝细胞膜融合进入细胞内，病毒基因组的复制过程需要经过共价闭合环状DNA(covalently close circular DNA, cccDNA)转录为前基因组RNA和若干种mRNA、前基因组RNA反转录为负链DNA、以负链DNA为模板复制正链DNA、双链DNA转变为成熟cccDNA等几个生物合成阶段。由前基因组RNA转换为双链环状DNA的过程中，需要一系列同功拓扑酶、DNA聚合酶(DNAp)进行复杂的反应。部分HBV DNA可在DNA整合酶作用下，整合到宿主靶细胞基因组中。 MAP30(momordica anti-HIV protein of 30kD,MAP30)是从葫芦科萦一门阵医大学俘士学位今仑文植物苦瓜种子中纯化的一种单链核糖体失活蛋白。国外实验研究表明，MAP30对HIV及疙疹病毒等都具有较明显的抑制作用。MAP30抗HW病毒的机制是:(1) MAP30进入HIV感染细胞后，非特异性地使核糖体失活，不能合成病毒复制所需要的酶及蛋白质，而干扰病毒复制。因此MAP3O抗病毒作用不是HIV特异的。(2)直接作用于病毒DNA、RNA，使超螺旋DNA变成缺口环状或线状DNA，并使之拓扑失活，而丧失复制、转录的功能。(3)抑制HIV整合酶的活性。 已知HBV和HIV基因组的复制有相同之处，都有逆转录复制阶段。王临旭等实验研究发现，MAP30对2.2.巧细胞分泌HBsAg、HBeAg及细胞内外HBV DNA均有明显的抑制作用，表明MAP3O在体外具有抗HBV的作用。基于上述理论和实验研究结果，本课题根据肝实质细胞膜上存在有能专一识别和结合半乳糖基的特异性无唾液酸蛋白受体(asialoglycoprotein reeeptor，ASGp一R)这一特性，设想通过制备了Gal一ABH一MAP3o交联物，将MAP30特异性地导入肝细胞，并进一步深入研究其体内外抗HBV的活性。 首先采用光化学法，以双功能的交联剂ABH(p一azidob~ylhydrazide，交联剂)为桥梁，依次将半乳糖(galactose，Gal)和MAP30交联，构建了Gal一ABH一MAP30交联物，经紫外扫描对照鉴定，证明Gal一ABH一 MAP30中MAP30与Gal一ABH是化学偶联。交联率达86.2%。 用氯胺T法将’z5l标记MAP30及Gal一ABH一MAP30，放射性示踪观察’251一Gal一ABH一MAP30/l气一MAP30在小鼠体内的生物分布特性，显示，2，I一Gal一ABH一MAP30的肝浓聚水平及速度远远大于’251一MAP3o，’2、一Gal一ABH一MAP3o在血液中的分布远小于’251一MAP3o，且具有肝靶向药物在血液中的再分布特点。体内竞争结合试验显示，事先注射非放射性Gal一ABH组，肝摄取1251一Gal一ABH一MAP30数量减少，速度延缓，肾脏排泄增强，表明肝细胞摄取Gal一ABH一MAP30具有特异性。一4一第一门阵医口悦学巾件d匕学位金仑文 将Gal一ABH一MAP30及MAP3o，分别加入2.2.15细胞培养液，结果表明，Gal一ABH一MAp30及MAp30对2.2.15细胞HBeAg的表达及HBVDNA合成均有抑制作用，其中Gal一ABH一MAP30作用强，发生最大效应的时间也较早。相同剂量的Gal一ABH一MAP30对HBeAg及HBv DNA抑制效应明显高于MAp3o(p<0.05):0.1 pg/ml的Gal一ABH一MAP3o与1.0pg/ml MAP30具有相似的HBeAg和HBv DNA表达抑制率，提示相当于MAP30 1/10剂量的Gal一ABH一MAP30既能发挥相似的抗病毒效应;免疫组化、激光共聚焦及原位杂交实验亦证实了上述结果。 将半乳糖介导的药物用于ayw亚型HBV转基因小鼠，发现Gal一ABH一MAP3O交联物及MAP30均能抑制血清及肝组织HBV基因的表达，且Gal一ABH一MAP3O交联物的作用优于MAP3O的作用。 以上实验研究表明，Gal一ABH一MAP30体内外应用具有较好的肝细胞/肝脏靶向性，与半乳糖交联可以明显提高MAP30的抗HBV效应，是具有一定应用前景的病毒性乙型肝炎肝靶向治疗的药物。