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背景及目的:成纤维细胞生长因子受体（FGFRs）是受体酪氨酸激酶（RTKs）的一个亚家族,主要包括FGFR1、2、3、4等4种亚型。FGFR1-4在部分实体瘤和血液瘤中表现出异常激活并激活下游信号,促进细胞的恶性增殖、迁移和侵袭,进而导致肿瘤的发生与发展。尽管多种FGFR抑制剂对FGFR1异常激活的肿瘤患者有效,但FGFR1突变耐药成为新的尚未解决的临床问题,尤其是以守门员位点V561为主的突变耐药。到目前为止,对FGFR1突变耐药有效的二代抑制剂仍处于早期研发阶段,尚无批准上市的药物。本论文拟系统研究本团队先前开发的、目前处于NDA阶段的1.1类新药GZD824作为pan-FGFR抑制剂体内外克服FGFR1-V561M等突变耐药的作用及机制,以期为该类患者带来新的治疗选择。方法:本论文首先采用基于FRET的Z’-LYTETM方法对GZD824进行体外激酶活性测试;然后使用电穿孔转染法对Ba/F3细胞进行TEL-FGFR1质粒转染,构建并得到了一系列稳定表达FGFR1野生型及突变型的Ba/F3工具细胞;进而在Ba/F3稳定细胞株等模型上考察GZD824体外抗增殖活性,使用分子对接、CETSA、Western Blot、免疫共沉淀、流式细胞术等研究GZD824抗增殖及克服耐药的机制研究。在此基础上构建小鼠移植瘤模型,考察GZD824体内抗肿瘤增殖作用,并用Ki-67,TUNEL染色法等研究GZD824对肿瘤组织细胞增殖、凋亡的影响。结果:在激酶水平,GZD824对FGFR1/2/3/4激酶活性分别为4.14±0.96、2.77±0.082、8.10±0.15和30.27±21.66 n M;在细胞水平,GZD824能够剂量依赖性抑制不同活化机制的FGFR异常激活癌细胞,并能有效克服FGFR1 V561M/F、K656N/E突变耐药,对Ba/F3-FGFR1-V561M、Ba/F3-FGFR1-V561F门卫突变细胞IC50分别为55±3.7、12±0.5 n M。通过对其作用机制探讨发现,GZD824以II型抑制剂的结合模式与FGFR1蛋白结合口袋稳定结合,能剂量依赖性地抑制FGFR1及其下游关键信号通路的激活,并能抑制细胞的增殖及促进细胞凋亡,GZD824还能通过泛素-蛋白酶体系统降解Ba/F3工具细胞中FGFR1蛋白。在动物水平,GZD824能抑制小鼠体内移植瘤的生长,并抑制肿瘤组织细胞的增殖及诱导凋亡发生。结论:本研究通过一系列的药理学实验证明GZD824作为一个pan-FGFR抑制剂可体内外克服FGFR1-V561M/F等突变耐药,为进一步拓宽GZD824在临床试验中的适应症提供了重要研究基础。