【摘 要】
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目的:牙周炎是一种慢性进展性疾病,常伴随骨的吸收和牙的丢失。牙周炎骨吸收的修复目前仍是一个挑战。骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）具有成骨、成软骨和成脂等多向分化的能力,其中成骨分化在骨修复和再生中发挥重要作用。海洋天然产物已被证明具有多种生物学活性,包括抗肿瘤、抗炎等,然而海洋天然产物及其衍生物在骨代谢的探索远远不足。方法:我们从
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目的:牙周炎是一种慢性进展性疾病,常伴随骨的吸收和牙的丢失。牙周炎骨吸收的修复目前仍是一个挑战。骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）具有成骨、成软骨和成脂等多向分化的能力,其中成骨分化在骨修复和再生中发挥重要作用。海洋天然产物已被证明具有多种生物学活性,包括抗肿瘤、抗炎等,然而海洋天然产物及其衍生物在骨代谢的探索远远不足。方法:我们从柳珊瑚来源的真菌Scopulariopsis sp中分离获得一系列4-苯基-2（1H）-喹啉酮类天然产物,经过结构优化,得到一系列衍生物。部分前期细胞学实验分析,发现衍生物CHNQD-00603促进成骨相关基因的表达。为了进一步探索CHNQD-00603对BMSCs的影响,我们分别进行了细胞毒性实验、实时荧光定量聚合酶链反应（quantificational real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR）实验、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色和茜素红S染色（Alizarin red S staining,ARS）分析来评估该衍生物对BMSCs的细胞毒性和成骨分化能力的影响。通过免疫印迹（western blotting,WB）实验、q RT-PCR和扫描电镜评估和鉴定自噬的水平。然后使用3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）自噬抑制剂进一步检测自噬在BMSCs成骨分化中的作用。基于自噬相关基因的表达,我们通过生物信息学的方法预测和鉴定了潜在的miRNAs.通过转染miR-452-3p的模拟物检测miR-452-3p与自噬之间的相互作用,及其在BMSCs成骨分化中的作用。结果:Cell counting kit-8（CCK-8）分析表明BMSCs在1μg/m LCHNQD-00603中培养7天后,细胞数目仍在增加但是细胞的增殖率与空白组相比降低。q RT-PCR、ALP染色和ARS结果说明0.5μg/m L和1μg/m L CHNQO-0060促进BMSCs成骨分化,但是1ug/m L浓度促进BMSCs成骨分化的能力最强。进一步的机制探索发现1μg/m LCHNQD-00603激活了自噬。使用自噬抑制剂3-MA抑制自噬的活性后,CHNQD-00603增强的成骨分化同时被抑制。说明自噬在CHNQD-00603诱导BMSCs成骨分化中发挥重要作用。接着,我们通过生物信息学和q RT-PCR对miRNA进行预测和鉴定,结果发现miR-452-3p的表达与对照组相比有所降低,然后我们分别使用miR-452-3p阴性对照NC和模拟物mimics转染BMSCs并检测其自噬的水平和成骨分化能力,结果显示过表达miR-452-3p降低了自噬的水平和CHNQD-00603诱导的成骨分化。结论:我们的数据表明CHNQD-00603通过激活自噬的方式促进BMSCs的成骨分化,并且miR-452-3p在这一过程中发挥重要作用。
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通过文献调查、实验探究等方法研究分析高温条件下淀粉和淀粉酶混合液遇碘不变蓝的原因,发现其主要与淀粉、I2-KI溶液体系的可逆热色性有关,其次也与淀粉本身具有的弱还原性有关,最后给出“温度对酶活性影响”实验设计的改进建议。
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