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马铃薯是世界第四大粮食作物,它属于一年生茄科茄属作物,具有很高营养价值和使用价值。马铃薯极易感染病毒,已经报道的可以侵染马铃薯的病毒超过35种,对四川省马铃薯产业危害最严重的有6种病毒,主要是马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯A病毒(PVA)、马铃薯卷叶病毒(PLRV)、马铃薯M病毒(PVM)。研究表明,这6种马铃薯病毒不仅可以单一侵染植株,还常常伴有复合侵染,严重影响马铃薯的品质和产量。四川省自2006年至今没有再次对四川省马铃薯6种主要病毒的分布进行普查,为了解这6种病毒在四川省的分布,本试验应用血清学双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)对采自四川省不同海拔地区500m以下、500-1000m以及1000m以上的16个县(市)的1003份田间马铃薯样品进行检测,检测结果显示,6种主要马铃薯病毒在四川省均有不同程度的发病,PVA的发病率为10.87%,PVM的发病率为5.68%,PLRV的发病率为5.38%,PVY的发病率为19.44%,PVS的发病率为26.44%,PVX的发病率为18.74%。2006年,四川省对马铃薯病毒的分布情况进行了一次调查,结果显示PVA、PVM、PLRV、PVY、PVS和PVX的发病率分别为16,41%、9.58%、3.58%、7.14%、61.77%和17.74%,与2015年调查结果相比较可看出,PVS病毒的发病率降低近35%,PVA的发病率下降5%左右,PVY的发病率增加近12%,其余三种病毒的发病率变化不大,总体来说,除了PVY以外,其余5种病毒的发病情况得到一定程度的控制,这与近些年马铃薯脱毒种薯的种植有很大的关系。不同海拔高度的发病情况也不相同,整体来说海拔在500m以下和500-1000m发病率较高,1000m以上发病率相对较低；每种病毒在不同海拔的发病情况存在差异,PVA和PVY在海拔500m以下地区的发病率较高,PLRV、PVM和PVS在海拔500-1000m地区发病率较高,PVX在海拔1000m以上地区发病率较高；PVM和PLRV病毒在不同海拔地区和不同季节发病率最低,说明不同海拔对马铃薯6种主要病毒的发病情况有一定的影响,但季节对其影响不大。2014-2015年,对四川省25个公司的4793份脱毒种薯样品进行DAS-ELISA检测,检测结果显示,PVS的检出率最高,达到5.3%,其次是PVM和PVY,检出率分别为2.09%和2.04%,PVA、PVX和PLRV的检出率在1%以下；四川省脱毒种薯的生产主要采用基础苗、原原种、原种和生产种四代种薯繁育体系,检测的样品中基础苗的合格率为96.75%,原原种合格率为99.53%,原种合格率为83.74%,生产种合格率52.24%,虽然基础苗、原原种的合格率都相对较高,但并未达到纯度100%的要求,因此,要从源头上提高脱毒种薯种苗质量,生产中要做到及时防控,降低病毒的发生目前,DAS-ELISA是检测马铃薯病毒的主要方法,但因其存在成本高、灵敏度不足等缺点,近几年,分子生物学的方法已经广泛应用到马铃薯病毒的检测中。本试验研究并建立适合同时检测PVA、PVM、PLRV、PVY、PVS和PVX6种主要马铃薯病毒的多重RT-PCR检测体系,根据GenBank中公布的6种病毒(CP)基因序列设计特异性引物,并对反应过程中的Taq酶浓度、dNTPs浓度、退火温度和循环次数等主要影响因素进行优化,结果表明在25ul的体系中Taq酶的终浓度为0.03U/ul、dNTPs的终浓度为0.16mmol/L,反应程序中退火温度为54℃,循环次数为35次时,能同时检测出6种病毒,条带清晰明亮；测序后,6种病毒的序列经过NCBI BLAST比对,与已报道的相应病毒序列的同源性达到97%以上,证明6种病毒的扩增产物准确无误；灵敏度检测结果显示,该方法能检测到的最低浓度为10-3倍组织量；利用建立的多重RT-PCR反应体系对16份田间样品进行检测验证,建立的多重RT-PCR反应体系可以快速、准确、灵敏地同时检测单一或者复合侵染的6种马铃薯病毒。