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背景:恶性肿瘤的早期淋巴道转移致患者死亡率高、预后差,其发生机制一直是肿瘤学的研究难题。膜联蛋白A5(Annexin a5,Anxa5)是膜联蛋白家族(Annexins)成员,为Ca2+依赖性磷脂结合蛋白。多项研究表明,Anxa5异常表达与肿瘤发生发展、转移、耐药性等密切相关。本课题组前期采用蛋白质组学和基因芯片发现Anxa5在小鼠肝癌高淋巴道转移力Hca-F细胞中高表达,并通过siRNA干扰技术下调Anxa5在Hca-F细胞中的表达,获得两株下调率不同的单克隆细胞株,且Anxa5下调抑制Hca-F细胞的增殖能力。以上结果提示Anxa5可能是潜在的促进肝癌淋巴道转移的分子。目的:1、探究Anxa5稳定下调对Hca-F细胞侵袭、迁移、粘附能力的影响;2、探讨Anxa5调控Hca-F细胞侵袭、迁移、增殖、粘附的分子机制,为肿瘤转移治疗提供理论基础和作用靶点。方法:1、实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测单克隆细胞株Hca-F-shRNA1和Hca-F-shRNA2的Anxa5下调效率;2、Transwell小室和淋巴结原位杂交法检测Anxa5下调对Hca-F细胞体外迁移、侵袭、粘附能力的影响;3、qRT-PCR和Western blot检测Anxa5下调对增殖及侵袭、迁移相关分子c-jun、JNK、ERK、p38MAPK、AKT、MEK、E-cadherin表达变化的影响;4、Western blot检测Anxa5下调对Hca-F细胞在ERK1/2抑制剂PD98059作用后p-c-jun(Ser73)及E-cadherin表达的影响。结果:1、与Hca-F-shControl相比,两株单克隆细胞Hca-F-shRNA1和Hca-F-shRNA2的mRNA水平下调率分别为72.3%和97.1%,蛋白水平下调率分别为43.9%和99.7%;2、与Hca-F-shControl相比,Hca-F-shRNA2细胞的迁移和侵袭分别降低了50.71%和49.84%(p<0.05),而Hca-F-shRNA1细胞的迁移和侵袭能力无明显变化(p>0.05);3、与Hca-F-shControl相比,Hca-F-shRNA2细胞的淋巴结粘附能力显著降低了61.71%(p<0.01);4、Anxa5下调使p-ERK2的表达降低了92.7%(p<0.01),而对p-ERK1、JNK、p38MAPK、AKT、MEK无影响(p>0.05)。5、Anxa5下调使p-c-jun(Ser73)表达降低了68.3%(p<0.05);6、Anxa5下调使E-cadherin在mRNA和蛋白水平分别升高了253.4%(p<0.05)和808.0%(p<0.001);6、PD98059明显抑制Hca-F-shControl和Hca-F-shRNA2细胞p-ERK和p-c-jun(Ser73)的表达,同时显著促进Hca-F-shControl细胞E-cadherin的表达,但对Hca-F-sh RNA2细胞中E-cadherin表达无明显影响。结论:1、Anxa5下调到一定程度才可以抑制Hca-F细胞的体外侵袭和迁移能力;2、Anxa5下调抑制Hca-F细胞的体外淋巴结黏附能力,以此提示Anxa5下调可能会抑制Hca-F细胞的体内淋巴结转移能力;3、Anxa5下调通过抑制ERK而不是JNK,抑制p-c-jun(Ser73)的表达,以此来抑制Hca-F细胞的体外增殖能力;4、Anxa5下调通过抑制ERK促进E-cadherin的表达,以此来抑制Hca-F细胞的迁移和侵袭能力;5、Anxa5通过ERK通路调控小鼠肝癌Hca-F细胞恶性行为。