目的:本研究首先通过网络药理学研究方法,筛选出银屑Ⅰ号作用于银屑病的重要靶点及化合物,进一步通过网络分析预测出银屑Ⅰ号作用于银屑病可能的通路。构建银屑病细胞模型,验证银屑Ⅰ号对银屑病细胞模型的影响,而后构建VDR真核过表达质粒,并通过转染银屑病细胞模型检测银屑Ⅰ号对VDR基因调控的VDR/VEGF信号通路相关因子表达水平的影响。最后构建银屑病动物模型,探讨银屑Ⅰ号是否可通过干预VDR/VEGF信号通路调控免疫失衡、发挥银屑病治疗作用的同时是否具有剂量依赖性。方法:1.通过TCMSP数据库及文献资料得出银屑Ⅰ号对应的化合物成分,并依次从OB、DL、Caco2及BBB四个维度进行筛选;通过HIT、Swiss靶点数据预测数据库及TTD、DBD、Dis Ge NET数据库分别检索出银屑Ⅰ号成分对应的靶点及银屑病疾病对应的靶点,并通过去重整理得出银屑Ⅰ号药物-靶点-疾病网络;在STRING数据库中计算并将所有靶点自由度进行排序,选取自由度大于自由度平均值的靶点构建药物-靶点-疾病核心网络;应用GO-BP及KEGG数据库进行富集分析,完成银屑Ⅰ号作用于银屑病可能的靶点通路分析。2.SD大鼠25只随机分组后予生理盐水及银屑Ⅰ号连续灌胃7日,得到生理盐水及银屑Ⅰ号含药血清;对Ha Ca T细胞进行复苏、传代培养后,以含有TNF-α25μg/L的培养基构建银屑病细胞模型;将细胞依次设置为空白培养组、对照培养组、5%、10%、15%、20%、25%、30%无药及含药血清组,采用CCK-8法检测各组细胞活力,确定最佳含药血清浓度;将细胞依次设置为空白组、模型组、正常组及银屑Ⅰ号组,采用CCK-8法检测不同血清培养基干预后对细胞活力、增殖抑制率的影响,采用ELISA法测定各组细胞炎症因子表达情况,采用Annexin-V-FIFC及PI双染法测定各组细胞凋亡情况;通过引物设计、扩增及酶切等步骤构建VDR过表达质粒,并转染至TNF-α诱导的Ha Ca T细胞模型中,将细胞依次设置为对照组、空载质粒组及过表达质粒组,应用q PCR及免疫印迹法分别检测VDR在基因、蛋白层面的表达水平,验证过表达质粒构建是否成功;将细胞依次设置为空白组、模型组、银屑Ⅰ号组、空载质粒模型组、空载质粒银屑Ⅰ号组、过表达质粒模型组及过表达质粒银屑Ⅰ号组,采用CCK-8法依次检测各组细胞活性及生存率,并应用q PCR法检测各组细胞VDR、VEGF、RAR、RXR表达水平,应用免疫印迹法检测后四组细胞中VDR、VEGF表达情况。3.BALB/c小鼠30只适应性喂养后随机分为对照组、模型组、银屑Ⅰ号低、中、高剂量组,除对照组外,其余各组每日于备皮区涂抹62.5mg咪喹莫特软膏进行造模,造模同时银屑Ⅰ号低、中、高剂量组分别以20.34g/kg/d、40.69g/kg/d、81.38g/kg/d进行药液灌胃。干预期间观察小鼠一般情况,每日对各组小鼠进行称重、测量背部皮损厚度及PASI评分;7日后取材,收集小鼠外周血、脾脏组织及背部皮损,采用流式分析检测外周血T淋巴细胞分布情况、测定脾脏质量及脾肿胀指数以判断小鼠全身免疫失衡状态、HE染色观察小鼠背部皮损病理变化及应用q PCR、免疫印迹法分别测定局部皮损中VDR、VEGF、RAR、RXR基因、蛋白表达水平。结果:1.对银屑Ⅰ号对应化合物的成分筛选后共得到148个有效成分及其相对应的193个验证靶点和215个预测靶点,银屑病对应的390个靶点,经去重整理后得出的银屑Ⅰ号药物-靶点-疾病网络中共包括59个对应化合物和43个相关靶点;经计算节点自由度范围为1-17,平均值为3.569,故以节点自由度在3.569-17进行筛选得出药物-靶点-疾病核心网络,此网络中包含核心化合物18个、核心靶点15个;富集分析后得出银屑Ⅰ号作用于银屑病的主要通路共12条,其中血管内皮生长因子代谢通路及皮质类固醇反映信号通路具有串话作用。2.最佳含药血清浓度的确定及银屑Ⅰ号对银屑病细胞模型的干预2.1与对照培养组比较,10%、15%、25%及30%无药血清组细胞活力无差异（P>0.05）,5%、25%浓度的无药血清与含药血清组比较细胞活力具有统计学意义（P<0.01,P<0.05）;故最终选取25%为最佳含药血清浓度。2.2与正常组比较,模型组细胞活力升高（P<0.01）,细胞增殖抑制率下降（P<0.01）,银屑Ⅰ号组细胞活力下降（P<0.01）,银屑Ⅰ号组细胞增殖抑制率无差异（P>0.05）;与模型组比较,银屑Ⅰ号组细胞活力下降（P<0.01）,细胞增殖抑制率升高（P<0.01）。2.3与正常组比较,模型组IL-4含量下降（P<0.01）,TNF-α、IFN-γ含量上升（P<0.01）;与模型组比较,银屑Ⅰ号组中IL-4含量上升（P<0.01）,TNF-α、IFN-γ含量下降（P<0.01）。2.4与正常组比较,模型组中正常细胞比例增加（P<0.01）,总凋亡细胞比例下降（P<0.01）;与模型组比较,银屑Ⅰ号组中正常细胞比例减少（P<0.01）,总凋亡细胞比例显著上升（P<0.01）。3.过表达质粒的构建及验证3.1扩增后经琼脂糖凝胶电泳分析、双酶切后电泳分析后得到两条长度分别为5446bp和1302bp的条带,将阳性重组质粒进行测序后提示VDR基因已成功克隆至pc DNA3.0真核载体中。3.2与对照组比较,空载质粒组中VDR在m RNA及蛋白水平均无统计学差异（P>0.05）;与空载质粒组比较,过表达质粒组VDR在m RNA及蛋白水平均升高（P<0.01,P<0.05）。4.银屑Ⅰ号对转染过表达质粒银屑病细胞模型的影响4.1与模型组比较,银屑Ⅰ号组细胞活力显著下降（P<0.01）,空载质粒模型组细胞活力无统计学差异（P>0.05）;与空载质粒模型组比较,过表达质粒模型组细胞活力下降（P<0.05）;与过表达质粒模型组比较,过表达质粒银屑Ⅰ号组细胞活力下降（P<0.05）,细胞增殖抑制率上升（P<0.05）。4.2与模型组比较,银屑Ⅰ号组VDR、RAR、RXRm RNA表达水平上升（P<0.05,P<0.01,P<0.01）,VEGFm RNA表达水平下降（P<0.05）,空载质粒模型组中此四基因表达差异均无统计学意义（P>0.05）;与空载质粒模型组比较,过表达质粒模型组VDR、RAR、RXRm RNA表达水平上升（P<0.01,P<0.05,P<0.01）,VEGFm RNA表达水平下降（P<0.05）;与过表达质粒模型组比较,过表达质粒银屑Ⅰ号组VDR、RAR、RXRm RNA表达水平上升（P<0.05,P<0.05,P<0.01）,VEGFm RNA表达水平显著下降（P<0.01）。4.3与空载质粒模型组比较,过表达质粒模型组VDR蛋白表达水平上升（P<0.05）,VEGF蛋白表达水平下降（P<0.05）;与过表达质粒模型组比较,过表达质粒银屑Ⅰ号组VDR表达水平上升（P<0.01）,VEGF蛋白表达水平下降（P<0.05）。5.银屑病动物模型的构建及一般情况观察5.1干预期间各组小鼠可正常活动、摄食饮水、大小便,干预开始前和第三日时各组小鼠体重无差异（P>0.05）;第七日时,与对照组比较,模型组及银屑Ⅰ号低剂量组小鼠体重下降（P<0.05）,与模型组比较,低、中、高剂量组小鼠体重均未见差异（P>0.05）。5.2干预开始前各组小鼠背部皮损均呈淡红、光滑表现,各组小鼠背部皮损厚度及PASI评分均无差异（P>0.05）;对照组在干预期内皮肤厚度略有增厚,PASI评分始终为0分;第七日时,模型组小鼠背部显著增厚,呈现典型银屑病皮损表现,与模型组比较,复方各组小鼠背部皮损依次变薄,PASI评分依次降低（P<0.01,P<0.05）。5.3对各组小鼠背部皮损组织病理学观察可见,对照组小鼠背部皮损组织未见异常,模型组小鼠皮损组织表皮全层增厚,角质层可见大量角化不全细胞,棘层/颗粒层显著增厚,真皮乳头层轻微上延,可见炎症浸润细胞;与模型组比较,银屑Ⅰ号低剂量组小鼠皮损与模型组最为接近,而银屑Ⅰ号高剂量组小鼠皮损异常病理表现最轻微。5.4与对照组比较,模型组小鼠脾脏质量及脾肿胀指数均显著上升（P<0.01）,与模型组比较,银屑Ⅰ号低、中、高剂量组小鼠脾脏质量及脾肿胀指数依次降低（P<0.01）。6.各组小鼠背部皮损中VDR、VEGF、RAR、RXRm RNA及蛋白表达水平与对照组比较,模型组小鼠背部皮损VDR、RAR、RXR基因及蛋白表达均显著下降（P<0.01）,VEGF基因及蛋白表达均显著上升（P<0.01）;与模型组比较,银屑Ⅰ号高剂量组VDR、RAR、RXR基因、蛋白表达上升（P<0.01,P<0.05,P<0.01）,VEGF基因、蛋白表达下降（P<0.01）。7.各组小鼠外周血T淋巴细胞分布情况与对照组比较,模型组小鼠外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+显著上升（P<0.01）,CD4+/CD8+比例明显倒置（P<0.01）;与模型组比较,银屑Ⅰ号中、高剂量组中CD4+/CD8+比例升高（P<0.01）,且渐趋正常。结论:1.天然黄酮类及植物甾醇类化合物是银屑Ⅰ号发挥作用的主要物质基础,银屑Ⅰ号的作用靶点涉及到炎症、新生血管生成及角质形成细胞异常分化等方面,对于银屑病的治疗作用也是多方面的,可参与增殖、分化、代谢、炎症、免疫、肿瘤等诸多环节,其中,血管皮质类固醇反映信号通路和内皮生长因子代谢通路具有串话作用。2.VDR是VDR/VEGF信号通路中的关键因子,过表达VDR后可有效抑制TNF-α诱导的Ha Ca T细胞增殖活性。银屑Ⅰ号可通过上调VDR来上调RAR、RXR表达、下调VEGF表达,从而发挥抗炎、抗角质形成细胞异常增殖及抑制异常新生血管生成的作用。过表达VDR能有效提高银屑Ⅰ号对银屑病细胞模型的抑制作用,这可为如何增加复方疗效提供新的思路。3.银屑Ⅰ号可有效抑制银屑病细胞模型的活性及增殖率,促进细胞凋亡,抑制Th1/Th2异常漂移,改善炎症微环境,调控银屑病动物模型免疫失衡状态,但存在剂量依赖性。