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目的:通过免疫组化方法检测经腹腔注射葛根素的糖尿病大鼠视网膜促凋亡因子caspase-3的表达,来观察葛根素对糖尿病视网膜病变大鼠防治作用及机理。
材料和方法:构建糖尿病大鼠视网膜病变动物模型,此实验将wister大鼠分为三组:对照组,糖尿病组,糖尿病加葛根素干预组,后两组为造模组,造模组大鼠隔夜禁食,经腹腔一次性注射70mg/kg体重的1%链脲佐菌素(streptozotozin,STZ)溶解于0.1mol/L,PH4.6柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,3天后尾静脉取血测空腹血糖,以空腹血糖≥16.7mmol/L为选模成功。糖尿病+pue组每日行葛根素100mg/kg.d腹腔注射,6个月后猝死取大鼠视网膜行普通病理切片和消化铺片法,运用免疫组化方法(SABC法)检测凋亡细胞及其凋亡通路中的关键因子caspase-3促凋亡因子的表达,进行定位和定量分析。
结果:糖尿病组6个月大鼠视网膜caspase-3蛋白表达明显增强;糖尿病葛根素干预组6个月大鼠视网膜caspase-3蛋白表达明显下降;对照组6个月大鼠视网膜caspase-3蛋白也有少量表达,表明caspase-3确实参与了大鼠视网膜细胞凋亡过程,且糖尿病组和糖尿病葛根素干预组两组之间表达有区别;各组采用阳性表达指数作为阳性表达定量指标进行统计学定量分析,p值小于0.05,有统计学意义,从而初步论证葛根素对糖尿病大鼠视网膜病变产生了有效的预防效果,有可能成为防治糖尿病视网膜病变的有效药物。