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目的:探讨高糖诱导的小鼠肾小管上皮细胞中E2F转录因子1（E2F transcription factor 1）通过调控zeste 2多梳抑制复合物2（Enhancer of zeste 2 polycomb,EZH2）的表达,抑制细胞自噬水平,从而促进糖尿病肾脏疾病（Diabetes kidney disease,DKD）肾间质纤维化的发生,为深入理解DKD肾间质纤维化的发病机制提供实验依据。方法:1.动物实验:12只清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠随机分成正常对照（normal control,NC）组和糖尿病（Diabetes mellitus,DM）组,每组6只。采用链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）复制1型糖尿病小鼠模型。造模成功24周后,收集24h尿液,乙醚麻醉处死全部小鼠,眼球取血后检测相关生化指标;伊红染色法（Hematoxylin-eosin staining,HE）、Masson、天狼星红、PAS染色观察小鼠肾组织病理形态学改变;Western blot法检测E2F1、EZH2、自噬相关指标微管相关蛋白轻链1轻链3（Microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3Ⅱ/Ⅰ）、自噬降解底物蛋白1（Sequestosome 1,SQSTM1/p62）、上皮细胞向间充质转分化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）和纤维化相关指标α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle actin,α-SMA）、E-钙粘素(（E-cadherin）、Ⅲ-型胶原（CollagenⅢ）的蛋白表达情况;q PCR检测各组小鼠肾组织中E2F1、EZH2、α-SMA及E-cadherin的m RNA表达水平。2.细胞实验:（1）将小鼠肾小管上皮细胞（RTEC）分为正常糖（NG 5.5mmol/L）组和高糖（HG 30mmol/L）组,Western blot检测E2F1、EZH2、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、α-SMA、E-cadherin及CollagenⅢ的蛋白表达情况;q PCR检测各组细胞E2F1、EZH2、α-SMA及E-cadherin的m RNA表达水平;激光扫描共聚焦显微镜检测E2F1、EZH2及LC3的蛋白表达变化。（2）E2F1敲低/过表达实验:分组如下:（1）正常糖组:NG;（2）正常糖空载质粒对照组:NG+sh-vector/OE-vector;（3）正常糖敲低/过表达质粒组:NG+sh-E2F1/OE-E2F1;（4）高糖组:HG;（5）高糖空载质粒对照组:HG+sh-vector/OE-vector;（6）高糖敲低/过表达质粒组:HG+sh-E2F1/OE-E2F1。Western blot检测E2F1、EZH2、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、α-SMA、E-cadherin及CollagenⅢ的蛋白表达变化;q PCR检测各组细胞中E2F1、EZH2、α-SMA和E-cadherin的m RNA表达水平。（3）EZH2敲低/过表达实验:分组如下:（1）正常糖组:NG;（2）正常糖空载质粒对照组:NG+sh-vector/OE-vector;（3）正常糖敲低/过表达质粒组:NG+sh-EZH2/OE-EZH2;（4）高糖组:HG;（5）高糖空载质粒对照组:HG+sh-vector/OE-vector;（6）高糖敲低/过表达质粒组:HG+sh-EZH2/OE-EZH2。Western blot检测EZH2、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、α-SMA、E-cadherin及CollagenⅢ的蛋白表达变化;q PCR检测各组细胞中EZH2、α-SMA和E-cadherin的m RNA表达水平。（4）双荧光素酶报告基因实验:分组如下:（1）EZH2启动子质粒、内参质粒组:EZH2 promotor+p RL-TK;（2）E2F1过表达空载质粒、EZH2启动子质粒、内参质粒组:OE-E2F1-vector+EZH2 promotor+p RL-TK;（3）E2F1过表达质粒、EZH2启动子质粒、内参质粒组:OE-E2F1+EZH2 promotor+p RL-TK;（4）E2F1过表达质粒、启动子对照质粒、内参质粒组:OE-E2F1-vector+Empty p GL3 basic+p RL-TK;（5）E2F1过表达空载质粒、启动子对照质粒、内参质粒组:OE-E2F1-vector+Empty p GL3 basicr+p RL-TK。检测各组细胞荧光活性强度。（5）共转染E2F1过表达质粒、EZH2敲低质粒实验:分组如下:（1）高糖组:HG;（2）高糖过表达E2F1空载质粒组:HG+OE-E2F1-vector;（3）高糖过表达E2F1质粒组:HG+OE-E2F1;（4）高糖敲低EZH2空载质粒组:HG+sh-EZH2-vector;（5）高糖敲低EZH2质粒组:HG+sh-EZH2;（6）高糖过表达E2F1质粒和敲低EZH2质粒组:HG+OE-E2F1+sh-EZH2。Western blot检测各组细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、α-SMA、E-cadherin及CollagenⅢ的蛋白表达变化。结果:1.动物实验结果:生化指标和病理形态结果提示1型糖尿病小鼠模型复制成功,且发生肾功能损伤;Western blot结果显示:DM组小鼠肾组织中E2F1、EZH2、p62、α-SMA及CollagenⅢ的蛋白表达较NC组明显增多（P＜0.05）,而LC3Ⅱ/Ⅰ、E-cadherin蛋白表达明显减少（P＜0.05）;q PCR结果显示:DM组小鼠肾组织中E2F1、EZH2及α-SMA的m RNA表达水平较NC组明显增多（P＜0.05）,而E-cadherin的m RNA表达水平降低（P＜0.05）。2.细胞实验结果:（1）Western blot结果显示:高糖培养的RTEC细胞中E2F1、EZH2、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、α-SMA、E-cadherin、CollagenⅢ的蛋白表达与DM小鼠肾组织中检测结果一致;q PCR结果显示:与NG组相比,HG组细胞中E2F1、EZH2及α-SMA的m RNA表达增多（P＜0.05）,E-cadherin表达降低（P＜0.05）;激光扫描共聚焦显微镜结果显示:高糖培养的RTEC细胞中E2F1、EZH2的荧光强度明显高于NG组,而LC3荧光强度较NG组明显减弱。（2）E2F1敲低/过表达实验结果:敲低RTEC细胞中E2F1（sh-E2F1）表达后:EZH2的m RNA和蛋白表达减少（P＜0.05）,LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达增加（P＜0.05）,p62和CollagenⅢ蛋白表达减少（P＜0.05）,E-cadherin的m RNA和蛋白表达增加（P＜0.05）,α-SMA的m RNA和蛋白表达减少（P＜0.05）;而过表达E2F1（OE-E2F1）后:EZH2的m RNA和蛋白表达增加（P＜0.05）,LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达减少（P＜0.05）,p62和CollagenⅢ蛋白表达增加（P＜0.05）,E-cadherin的m RNA和蛋白表达减少（P＜0.05）,α-SMA的m RNA和蛋白表达增加（P＜0.05）。（3）EZH2敲低/过表达实验结果:敲低RTEC细胞EZH2（sh-EZH2）表达后:LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达增加（P＜0.05）,p62和CollagenⅢ蛋白表达减少（P＜0.05）,E-cadherin的m RNA和蛋白表达增加（P＜0.05）,α-SMA的m RNA和蛋白表达减少（P＜0.05）;反之,过表达EZH2（OE-EZH2）后:LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达减少（P＜0.05）,p62和CollagenⅢ蛋白表达增加（P＜0.05）,E-cadherin的m RNA和蛋白表达减少（P＜0.05）,α-SMA的m RNA和蛋白表达增加（P＜0.05）。（4）双荧光素酶报告基因实验结果:在RTEC细胞中,与过表达E2F1+EZH2启动子对照质粒组相比,过表达E2F1+EZH2启动子质粒组的荧光活性强度明显增强（P＜0.01）。（5）共转染E2F1过表达质粒、EZH2敲低质粒实验结果:高糖状态下RTEC细胞过表达E2F1（OE-E2F1）后,p62、α-SMA、CollagenⅢ蛋白表达增加,LC3Ⅱ/Ⅰ、E-cadherin的蛋白表达减少（P＜0.01）;但共转E2F1过表达和EZH2敲低质粒（OE-E2F1+sh-EZH2）后,p62、α-SMA,CollagenⅢ的蛋白表达有所减少,LC3Ⅱ/Ⅰ、E-cadherin的蛋白表达有所增加（P＜0.01）,可部分逆转单独过表达E2F1的效应。结论:（1）EZH2可以抑制高糖诱导的小鼠肾小管上皮细胞自噬水平及促进EMT的发生,进而促进细胞外基质沉积。（2）E2F1可通过上调EZH2的表达抑制高糖诱导的小鼠肾小管上皮细胞自噬水平,从而促进EMT和DKD小鼠肾间质纤维化的发生。