霍山石斛多糖对结肠癌荷瘤小鼠的抑瘤作用研究

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霍山石斛(Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng)是我国历代本草中记载的一种名贵中草药,其茎现已通过安徽省地方食品安全标准,为药食同源原料,其主要活性成分——多糖已被证明对肺癌和胃癌荷瘤小鼠具有明显抑瘤作用。为进一步证明霍山石斛茎多糖(cDHPS)的抗肿瘤作用,本论文以位居全球肿瘤发病率和死亡率分别为第三和第二位的结肠癌为代表,构建CT26-WT结肠癌荷瘤小鼠模型,从荷瘤小鼠的肿瘤细胞增殖与凋亡、免疫应答效应和肠道菌群响应三个方面分析cDHPS抑制肿瘤生长的多重效应,以期为cDHPS抗肿瘤机制研究奠定基础,为cDHPS应用于延缓和抑制肿瘤的发生发展提供理论依据。取得的主要研究结果如下:(1)cDHPS可显著抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长。口服cDHPS可以有效抑制肿瘤体积和重量的增加,其中400 mg/kg·d剂量的cDHPS连续灌胃30 d,对肿瘤的抑制率可达到(62.14±3.62)%;HE染色、免疫组化和TUNEL免疫荧光检测结果表明cDHPS可通过抑制肿瘤细胞增殖和血管再生,促进肿瘤细胞凋亡,从而抑制肿瘤的生长。(2)cDHPS可有效增强荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫功能。脏器指数结果显示cDHPS能够改善脾脏肿大,增加胸腺指数,具有增强机体免疫和保护脏器的功效;免疫细胞的流式分析结果说明cDHPS对荷瘤小鼠肿瘤、脾脏以及外周血中的调节性T细胞分化有显著抑制作用,对CD4+T细胞、B细胞、树突状细胞以及巨噬细胞的增殖有明显促进作用;细胞因子检测结果表明cDHPS可以平衡荷瘤小鼠机体组织和肿瘤微环境中免疫因子的分泌状态,调节抗肿瘤免疫应答。(3)cDHPS可明显改善荷瘤小鼠的肠道菌群结构。小鼠粪便的16S r RNA高通量测序结果表明cDHPS可以显著增加肠道菌群丰度和物种多样性。在门水平上,cDHPS显著上调拟杆菌门丰度,下调变形菌门丰度和厚壁菌门与拟杆菌门比值(F/B值),使菌群结构向正常组靠近;在属水平上,cDHPS可以显著下调Desulfovibrio、Bacteroides、Helicobacter等致病菌和条件致病菌的相对丰度,上调Bacteroidales_S24-7_group_norank、Lactobacillus、Bifidobacterium、Ruminococcus_1、Ruminiclostridium_9等益生菌和短链脂肪酸产生菌的相对丰度。综上所述,cDHPS对CT26-WT结肠癌荷瘤小鼠具有显著的抗肿瘤作用,cDHPS调节的荷瘤小鼠免疫应答响应和肠道菌群结构改善可能在其抑制肿瘤细胞增殖和血管生成、促进肿瘤细胞凋亡中发挥重要作用。
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