论文部分内容阅读
目的:探讨ARL6IP5在肝癌,特别是丙型肝炎相关性肝癌的形成过程中的生物学功能。为肝癌的诊断与治疗提供新思路和策略。方法:收集人肝癌组织8对（HCV阳性4对,HCV阴性4对）。急性和慢性DEN处理（急性处理,一次性单剂量腹腔内注射150mg/kgDEN,6天;慢性处理,一次性单剂量腹腔内注射50mg/kg DEN,48周）小鼠,诱导肝损伤和肝癌动物模型。获得小鼠肝癌组织及小鼠非癌肝组织共54例,经实时荧光定量PCR（qPCR）和western blot方法检测ARL6IP5的表达情况。给Huh7细胞转染HCV核心蛋白JFH1,用qPCR和western blot方法检测被转染细胞中ARL6IP5的表达情况。选用HCV相关肝癌细胞株Huh7和永生化肝细胞MIHA,用小分子RNA干扰技术（siRNA-ARL6IP5）沉默ARL6IP5基因,然后检测该基因沉默后对细胞增殖能力、侵袭能力、克隆形成能力和细胞凋亡的影响。同时检测该基因沉默后对其他主要的信号通路如MAPKs（pERK1/2、pP38和pJNK）是否产生影响。选用Huh7和MIHA细胞株构建基因ARL6IP5过表达稳定细胞株,以空载体表达稳定细胞株为对照,在这些细胞中进行上述功能实验。结果:人肝癌组织中ARL6IP5的平均表达水平明显高于癌旁组,同时HCV阳性的肝癌组织中ARL6IP5的表达明显高于HCV阴性组。在给小鼠给予短期DEN处理后,小鼠肝组织中ARL6IP5的表达升高。DEN慢性处理（即给予DEN后～48周左右）小鼠中,多数出现肝肿瘤。利用westernblot检测,发现小鼠的肿瘤组织中ARL6IP5的表达明显高于非癌肝组织。在Huh7细胞感染HCV核心蛋白JFH1之后,ARL6IP5的表达也明显增高。细胞功能实验显示,ARL6IP5沉默后,Huh7与MIHA细胞的增殖、迁移、克隆形成能力及侵袭能力均明显降低,细胞凋亡增加,尤其早期凋亡增加明显,同时,MAPK信号通路中磷酸化ERK1/2（pERK1/2）与磷酸化p38（p-p38）表达均发生上调。以上结果均显示出显著的统计学差异（P<0.05）。相比之下,在ARL6IP5稳定过表达的Huh7与MIHA细胞,观察到与上述相反的改变趋势,即细胞的增殖、迁移、克隆形成能力及侵袭能力有所增加,而细胞凋亡减少,但实验组与对照组结果无统计学差异。结论:我们首次证实ARL6IP5可能是一种新的癌基因。我们推断,在正常生理状况下,该基因就具有潜在的癌基因生物学特性,当受到致癌因素刺激,如丙型病毒性肝炎感染后,该癌基因有可能活化,通过促进细胞增殖,细胞迁移,侵袭,抑制凋亡等作用参与细胞的恶性转化。目前的研究结果为未来进一步在体内实验明确证实该基因是否为致瘤癌基因研究奠定了理论依据和基础,也为人类肝癌特别是HCV相关肝癌诊断和治疗提供新思路和治疗靶点。