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背景/目的酒精滥用可引发酒精性肝病(Alcoholic liver disease,ALD),近年来,由于ALD的发生率和死亡率持续不断的增加,给中国和全世界的国家都造成了很大的经济负担,但是即使经过研究人员多年的实验研究,目前我们对ALD的发病机制仍旧不是很清楚。骨形态发生蛋白9(Bone Morphogenetic Protein 9,BMP9)是TGFβ超级家族的成员之一,主要是由肝脏星状细胞产生的,与多种肝脏疾病密切相关,例如BMP9可抑制肝再生,促进肝纤维化和肝癌等。但是由于人们对于BMP9在ALD发生发展过程的作用却仍不清楚,于是本课题通过基因敲除技术全身性敲除小鼠的BMP9基因,以探究BMP9在ALD发生发展过程中作用。方法1. 本课题组利用C57BL/6J野生型(Wild type,WT)小鼠构建全身性BMP9基因敲除(BMP9-/-)小鼠;2.利用构建好的BMP9-/-和WT小鼠,通过分别给予小鼠10天的对照或酒精液体饲料喂养和一次麦芽糖或酒精灌胃建立慢性+酒精灌胃模型(ALD模型,Gao-Binge模型);3.通过检测两组不同小鼠的肝损伤指标血清谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)的含量;HE染色,肝脏脂肪沉积(油红染色、肝内甘油三酯含量、测脂肪合成和氧化基因)、肝脏炎症(中性粒细胞、巨噬细胞免疫组化;促炎细胞因子和趋化因子相关基因表达情况)以及氧化应激指标(4-HNE免疫组化、氧化基因相关基因)探究BMP9对小鼠酒精性肝病的影响及其机制研究。结果1. 实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,q PCR)实验结果显示小鼠肝脏BMP9的表达水平最高,并且ALD模型中WT小鼠的BMP9表达水平显著增加。2. 在经过慢性+酒精灌胃模型后,首先,本研究发现ALD模型组(WT组和BMP9-/-组)小鼠的生化病理指标ALT,AST水平均高于相对应的ALD模型对照组(WT和BMP9-/-),还发现在两组ALD模型组中,BMP9-/-组的生化病理指标ALT,AST水平低于WT组。同样的,通过HE染色检测肝脏病理损伤情况发现再ALD模型中模型组的肝脏损伤程度大于相对应的ALD对照组,并且BMP9-/-模型组的损伤程度低于WT模型组。3. 通过油红染色、检测肝内甘油三酯含量和脂肪合成和氧化基因探究ALD模型中肝脏脂肪的沉积情况,研究发现敲除BMP9后BMP9-/-模型组小鼠肝脏的油红染色程度和甘油三脂含量均低于WT模型组,还发现BMP9-/-模型组中的脂肪合成基因表达上调水平高于WT模型组,而脂肪氧化基因下调程度低于WT模型组。4. 通过MPO,F4/80,4-HNE免疫组化和对炎症因子的检测探究小鼠肝脏炎症情况,发现相对于ALD对照组小鼠而言,经过ALD模型组小鼠的肝脏炎症程度均有所增加。此外,还发现在两组ALD模型组小鼠中,BMP9-/-组小鼠的肝脏炎症细胞浸润程度低于WT组。5.本研究发现在WT模型组中TLR4的表达水平增加,还发现在体外实验中BMP9可刺激TLR4表达增加。结论1.酒精刺激可诱导小鼠肝脏BMP9表达增加。2.在酒精性肝病中,BMP9增加了酒精诱导的小鼠肝脏损伤程度。3.BMP9加重肝脏酒精性肝病中肝脏的脂肪沉积。4. BMP9促进肝脏酒精性肝病中炎症浸润程度。5. BMP9可能是通过上调TLR4的表达从而增加酒精性肝病的肝脏损伤和炎症浸润程度的。