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猪圆环病毒3型(PCV3)自2016年在美国首次被发现以来,随后在世界多个国家相继报道,表明PCV3已经呈现广泛流行的态势。毫无疑问,这对世界范围内的养猪产业及相关产业造成了严重的损失,因此,建立有效的PCV3防控措施刻不容缓。目前研究PCV3的主要难题是很难从细胞系中分离出该病毒。然而,通过基于基因工程技术构建的病毒样颗粒(VLPs)可以揭示病毒的特征,并且无需分离到病毒即可实现这种目的。基于PCV3 VLPs的研究可能会提供新的思路,使人们对PCV3病毒有更好的了解,并具有潜在的治疗和诊断价值。PCV3的衣壳蛋白(Cap)是其唯一的结构蛋白,也是用于诊断和疫苗开发的重要抗原。本研究的主要目的是使重组PCV3 Cap蛋白在大肠杆菌中高效表达并自组装成为VLPs,并用于后续诊断方法的开发。因此设计并合成了5套密码子优化的Cap基因,包括从临床样品扩增的本实验室保存野生型PCV3毒株的Cap基因(wt-eCap),3套基于大肠杆菌密码子偏好完全或部分优化的重组Cap基因(opti-eCap),以及缺失核定位信号区域(NLS)的截短Cap基因(opti-dCap)。随后将这些基因片段插入pET30a表达载体,重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞中表达重组蛋白。通过SDS-PAGE分析可得表达opti-eCap-3的重组蛋白能够在大肠杆菌中高效并且以可溶形式表达,随后通过透射电子显微镜(TEM)鉴定纯化的重组蛋白,可以清晰地观察到大量直径10nm左右,大小均一的圆形空心颗粒。因此可以确定部分密码子优化的opti-eCap-3可以在大肠杆菌中稳定表达并且能够自组装成为VLPs,并以此用于后续诊断方法的开发。在得到高纯度的PCV3 VLPs后,将其用于包被抗原,建立基于VLPs的血清学诊断方法。经多步试验优化,确定最佳抗原包被浓度为5μɡ/mL,血清稀释度为1:200,酶标二抗稀释度为1:5000,血清孵育时间为60min,二抗孵育时间为45min,底物显色时间为15min。最终建立的间接ELISA方法具有高度特异性和敏感性,并成功对373份临床猪血清进行PCV3抗体检测。最终的结果表明,基于PCV3VLPs的间接ELISA方法将是检测血清样品中PCV3抗体存在的有价值的工具,有助于在临床中筛查大量的猪血清,提供了一种简便、快捷的诊断方法。