裸体方格星虫（Sipunculus nudus L.）（以下全文简称方格星虫）主要分布在海南、广西、广东和福建沿海,是一种高蛋白、高营养价值的水产品。目前,关于方格星虫的活性研究主要包括抗氧化、抗菌、抗病毒、抗辐射、降血压、改善学习记忆、抗疲劳和免疫调节等。在方格星虫免疫活性研究方面,活性成分主要是多糖和粗提物,对于方格星虫蛋白的免疫活性研究很少,因此方格星虫免疫活性肽还有很大的研究空间。本文以方格星虫为原料,对方格星虫蛋白的理化特性进行研究;通过pH调节法制备分离蛋白,研究分离蛋白的酶解工艺;通过体外细胞实验和体内动物实验验证酶解产物各超滤组分的免疫活性;以体外免疫活性为评价指标对超滤组分进行活性追踪,通过分离纯化和质谱鉴定确定免疫活性肽的氨基酸序列,皆在为开发方格星虫高值化利用和免疫产品提供理论依据。主要研究内容和结果如下:（1）方格星虫是一种高蛋白低脂肪的水产品,蛋白含量和脂肪含量分别占原料干基的80.87%和2.37%。在方格星虫蛋白组成中,水溶性蛋白、盐溶性蛋白和不溶性蛋白分别占总蛋白的19.05%、43.58%和29.35%。SDS-PAGE电泳分析显示,水溶性蛋白主要在6 kDa-200 kDa范围内,盐溶性蛋白主要在29-50 kDa和66-200 kDa范围内,不溶性蛋白在48 kDa、102.3 kDa和200 kDa附近存在明显条带。方格星虫组成蛋白氨基酸种类齐全,3种组成蛋白与免疫相关的碱性氨基酸和疏水氨基酸含量均超过总氨基酸的50%。DSC结果显示,方格星虫水溶性蛋白、盐溶性蛋白和不溶性蛋白的变性温度分别为77.9℃、69.2℃和54.9℃。（2）以小鼠脾淋巴细胞的增殖率为指标,通过酶筛选实验确定动物蛋白酶和木瓜蛋白酶组成的复合酶（复合比例1:1）为实验用酶。通过单因素和响应面优化方格星虫分离蛋白酶解实验,确定最优酶解条件为液料比（v/m）5:1、时间4.5 h、加酶量2460 U/g、温度56℃在该条件下脾淋巴细胞的增殖率值为60.22%,与该模型预测值60.61%相近（p>0.05）。（3）方格星虫酶解产物经过超滤分级得到<2.5 kDa组分和>2.5 kDa组分;体外细胞实验表明:<2.5 kDa组分和>2.5 KD组分分别在浓度为0.6 mg/mL和0.9mg/mL时免疫活性最好,并且<2.5 kDa组分（0.6 mg/mL）的免疫活性高于>2.5 kDa组分（0.9 mg/mL）（p<0.05）;体内动物实验表明:方格星虫<2.5 kDa组分的3个剂量组均能够增强小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能和NK细胞活性,通过《保健食品检验与评价技术规范》中增强免疫力功能检验方法判定方格星虫<2.5 kDa组分有助于增强免疫力。（4）以体外免疫活性为评价指标对<2.5kDa组分进行活性追踪,利用Sephadex G-25凝胶层析和Symmetry C₁₈高效液相色谱进行分离纯化得到高活性组分F₄₃₁,最终对F₄₃₁组分进行质谱分析,结果表明免疫活性肽的氨基酸序列为苯丙氨酸-赖氨酸（FK）或苯丙氨酸-谷氨酰胺（FQ）。