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目的：观察应激诱导的抑郁模型小鼠和Ahi1基因敲除（Ahi1 KO）小鼠海马脑区内雌激素受体beta（Estrogen receptor beta，ERβ），色氨酸羟化酶-2（Tryptophan hydroxylase-2，TPH2）及5-HT含量的变化，从而进一步探讨Ahi1蛋白水平下降导致5-HT含量降低引发小鼠抑郁样表型的机制。 方法：实验分为三部分，第一部分进行Ahi1通过ERβ/TPH2信号通路调控小鼠脑内5-HT水平初步研究；第二部分进行Ahi1通过ERβ/TPH2信号通路调控小鼠脑内5-HT水平机制研究；第三部分给予ERβ激动剂对Ahi1 KO小鼠抑郁样表型及5-HT的影响。（1）建立空间行为限制（Spatial restraint stress，Stress）的抑郁症小鼠模型，取50ml离心管在离心管顶部制作适量的小孔以供小鼠呼吸，管底塞上棉花防止小鼠尾巴被夹伤。将健康C57雄性小鼠随机分为对照（Con）组与Stress组，Stress组小鼠每天放入空间行为限制装置内2小时，同时对照（Con）组禁食、禁水2小时，持续30天。造模结束后，两组小鼠分别进行经典的行为学实验，如悬尾实验（tail suspension test，TST）和强迫游泳实验（forcedswimming test，FST），以此判断小鼠是否存在抑郁样行为。Ahi1基因敲除（Ahi1 knockout, Ahi1 KO）的抑郁动物模型小鼠，则选取8周龄Ahi1+/-（heterozygote/HET）小鼠(作为Con组)和Ahi1-/-(knockout/KO)小鼠进行实验。研究表明，Ahi1 KO小鼠有明显的抑郁样行为，同时在经典的抑郁样行为学检测如悬尾实验（tail suspension test，TST）、强迫游泳实验（forced swimming test，FST）中，小鼠表现出明显的活动减少。由此推断，Ahi1基因敲除（Ahi1 knockout,Ahi1 KO）的抑郁动物模型适用于小鼠抑郁样表型的研究。采用Western blot法测定小鼠脑组织内ERβ、TPH2、雌激素受体α（ERα）、血清素转运体（serotonin transporter，SERT）蛋白的表达情况；采用高效液相色谱法（High performance liquid chromatography，HPLC）测定小鼠脑组织中神经递质五羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）的含量；采用荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative polymerase chain reaction，Q-PCR）检测小鼠脑组织中ERβ，TPH2 mRNA水平；利用免疫荧光染色（Immunofluorescence stainingtest，IF）的方法，检测ERβ蛋白在小鼠海马脑区的表达情况；采用核浆分离试剂盒（Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit）、Western blot法和免疫荧光染色实验检测小鼠脑组织中ERβ蛋白在胞核和胞浆的表达水平；（2）采用Ahi1 siRNA转染PC12细胞，将细胞分为对照组、Ahi1-siRNA组；利用Western blot方法和核浆分离试剂盒分别检测对照组和Ahi1-siRNA组细胞中糖皮质激素受体（Glucocorticoid receptor，GR）、ERβ在细胞核和细胞浆中蛋白表达情况；运用Q-PCR方法检测对照组和Ahi1-siRNA细胞中ERβmRNA的含量。地塞米松（Dexamethasone，DEX）处理PC12细胞，实验共分对照组、DEX组；采用核浆分离试剂盒和Western blot方法分别测定对照组和DEX组细胞中GR、ERβ在胞核和胞浆的蛋白表达情况；采用荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative polymerase chain reaction，Q-PCR）检测对照组和DEX组细胞中ERβmRNA的含量变化情况。采用GR siRNA转染PC12细胞，将细胞分为对照组和GR siRNA组；采用Western blot法测定对照组和GR siRNA组细胞中GR、ERβ蛋白的表达变化；Q-PCR方法检测对照组和GR siRNA组细胞中ERβmRNA的含量。采用转染和双荧光素酶报告基因实验（Transfection and dual luciferase reporter assay）检测PGL3-basic-ERβ质粒转染的293T细胞，给予GR siRNA和DEX处理后，PGL3-basic-ERβ-promoter质粒的表达情况。（3）将Ahi1小鼠随机分为Ahi1Het+Vehicle组、Ahi1Het+ ERβ激动剂组、Ahi1KO+Vehicle组、Ahi1KO+ ERβ激动剂组。ERβ激动剂（LY-500307）给药量为0.2mg/kg，每天09：00-10：00皮下注射；持续给药3周后，上述各组小鼠进行行为学检测；HPLC法检测以上各组小鼠脑组织中神经递质5-HT的含量变化情况；利用Western blot实验测定以上各组小鼠脑组织中TPH2蛋白的表达情况； 结果： （1）建模30天结束后，与对照组相比，Stress组小鼠在悬尾实验和强迫游泳实验中的静止时间明显增长（P<0.05）；Stress组小鼠海马组织内的ERβ、TPH2蛋白及ERβ、TPH2 mRNA的表达均明显低于对照组，差异具有统计学意义；Ahi1KO小鼠的海马组织中ERβ、TPH2蛋白及ERβ、TPH2 mRNA均明显低于Ahi1Het小鼠（P<0.05）；Ahi1KO小鼠海马脑组织中SERT，ERα蛋白水平较对照组小鼠无明显差异；相比于Ahi1Het小鼠，Ahi1KO小鼠海马脑组织中五羟色胺含量显著降低（P<0.05）；核浆分离检测结果显示，Ahi1KO小鼠海马组织中ERβ蛋白在细胞核内的表达水平明显低于Ahi1Het组小鼠，差异具有统计学意义；而细胞浆中ERβ蛋白水平并没有明显差异；（2）在Ahi1-siRNA处理的细胞中，Ahi1 siRNA（实验组）的ERβ蛋白、mRNA均显著低于Control siRNA（对照组），差异具有统计学意义；Ahi1 siRNA组的细胞中Ahi1蛋白表达量显著低于对照组，差异具有统计学意义。在Ahi1 siRNA处理的PC12细胞中，Ahi1 siRNA组GR蛋白在细胞核的含量显著高于对照组，差异具有统计意义；而ERβ蛋白在细胞核的含量显著低于对照组，差异具有统计意义；同时Ahi1 siRNA组细胞中GR蛋白在细胞浆的含量显著较对照组显著减少，差异具有统计意义；而ERβ的蛋白水平在两组细胞的细胞浆内的表达没有明显差异，说明Ahi1可能通过抑制GR蛋白的核转移提高ERβ表达。DEX处理的PC12细胞中，DEX组细胞中ERβ总蛋白表达显著低于对照组，差异具有统计学意义；核浆分离检测结果表明，DEX处理组细胞中ERβ蛋白在核内的表达水平明显低于对照组，而GR蛋白表达明显高于对照组，差异均有统计学意义；与对照组相比，DEX组细胞中ERβ蛋白表达在细胞浆内无明显差异，而GR蛋白在细胞浆内的表达显著降低，差异具有统计学意义；在PGL3-basic-ERβ-promoter转染的293T细胞中，GR siRNA和DEX共处理组的启动子表达增加，提示GR通过结合到ERβ启动子上抑制ERβ表达，从而下调ERβ/TH2信号通路，降低五羟色胺含量从而使小鼠出现抑郁样表现。（3）Ahi1KO小鼠和对照组小鼠分别给予ERβ激动剂治疗3周后，Ahi1KO小鼠在悬尾实验和强迫游泳实验中的静止时间明显低于对照组小鼠（P<0.05），表明ERβ激动剂对小鼠抑郁样表现具有一定的治疗作用，使得小鼠抑郁样行为得到改善；ERβ激动剂治疗后，Ahi1KO小鼠海马组织内五羟色胺含量显著升高，差异具有统计意义；同时Western blot结果显示，Ahi1KO小鼠海马组织内TPH2蛋白表达显著提高较对照组小鼠，差异具有统计意义。 结论： 1.应激诱导的抑郁模型小鼠和Ahi1 KO小鼠脑内Ahi1蛋白水平降低导致ERβ、TPH2蛋白、mRNA表达和5-HT含量降低，但并未改变ERα，SERT蛋白的表达。 2.Ahi1含量降低导致大量的GR蛋白由细胞浆进入细胞核，入核后的GR结合至ERβ启动子上抑制ERβ表达，从而下调ERβ-TH2信号通路，导致五羟色胺含量降低继而引发小鼠抑郁样行为。 3.ERβ激动剂可以改善Ahi1KO小鼠的抑郁样表现同时提高TPH2蛋白表达量。