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水稻叶片是进行光合、蒸腾和呼吸作用的主要场所。在水稻高产育种和株型改良中,水稻的叶片性状一直是育种家关注的焦点。水稻卷叶作为叶片的一种重要性状,具有保持叶片直立而不披垂的典型效应。水稻卷叶资源丰富,也有较多关于水稻卷叶基因的报道,但关于水稻叶片卷曲分子机理的研究仍然匮乏。
本研究的试验材料为水稻卷叶基因r18(t)内源表达载体,通过农杆菌介导转化中花11的转基因材料39GOE。39GOE共有10个转基因株系,均表现为叶片外卷的卷叶表型。通过对各株系的卷叶性状分离比进行卡方检验,推断各株系T-DNA插入的拷贝数。采用反向PCR技术获得T-DNA旁邻水稻基因组序列,确定内卷基因rl8(t)插入到水稻基因组中的位置。对各株系的株高、穗数和主穗穗长性状进行统计分析,探讨卷叶基因r18(t)的功能与位置效应。运用RT-PCR技术对rl8(t)进行表达分析,研究该基因表达的特点。本研究获得的主要结果如下:
(1)通过卷叶性状分离的统计分析,推断出39GOE各株系T-DNA插入的拷贝数。结果表明,39GOE各株系(除了39GOE6)转入的内源卷叶基因rl8(t)均为单个拷贝,即卷叶表型受1对等位基因控制。
(2)运用反向PCR方法获得T-DNA插入旁邻的水稻基因组序列。39GOE各株系的T-DNA插入整合至染色体的不同位置。在确定位置的9个株系中,T-DNA插入于水稻的第2、4、6、10、11、12染色体上,其中39GOE3与39GOFA均位于第10染色体上,而39GOE2、39GOE5、39GOE9均位于第12染色体上,T-DNA插入水稻染色体具有一定的偏好性。其中,有4个株系T-DNA插入到基因的内部。
(3)表型统计分析显示,39GOE各株系的表型具有明显的差异。从卷叶表型上看,39GOE6Hm卷叶的程度最轻,39GOE7Hm与39GOE5Hm卷叶的程度也较轻。在株高、穗数与主穗穗长等表型上看,39GOE各株系表现出差异性,以此推断,当水稻内源基因rl8(t)插入水稻基因组不同位置时,会产生不同的表型效应。
(4) rl8(t)在39GOE各株系中的表达水平并不完全一致。39GOE6Hm的表达水平相对于其他株系最低,39GOE2Hm的表达水平也较低,其他株系的表达水平则与39Hm相当。因此,r18(t)的表达水平高低与其所处基因组的位置有关。
(5)rl8(t)在39GOE各种组织器官中均有表达,但在不同组织器官表达水平具有明显差异。叶片、叶鞘、根、节间以及穗等组织相比较,rl8(t)在节间的表达水平最高,在根中的表达水平微弱。
上述结果表明,水稻内源卷叶基因r18(t)片段转入到野生型材料中花11中,能引起卷叶、矮化以及穗数减少等表型的变化。当rl8(t)插入水稻基因组不同位置时,所导致的表型是有差异的,而且表达水平也并不完全一致。因而,推断出卷叶基因r18(t)对水稻的生长发育调控作用具有多重效应,该基因的表达具有位置效应。