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利用病毒来源的基因获得抗病毒的转基因植株，是遗传工程中改良作物对病毒病抗性的主要措施之一。其中，利用病毒的外壳蛋白（CP）基因为转基因是较为成熟的抗病毒育种策略。近年来，对外壳蛋白介导的保护作用的研究中发现了一种新的抗病毒策略：RNA介导的病毒抗性(RMVR, RNA-mediated virus resistance)。RMVR具有抗病性强、抗性持久、生物安全性高等优点，因此是一种具有较大潜在应用价值的植物抗病毒基因工程策略。本研究分离纯化了马铃薯X病毒山东分离物（PVX-SD1），利用RT-PCR方法克隆了它的CP基因，根据序列分析对其进行株系鉴定；对山东省PVX田间带毒率进行调查；同时利用RMVR策略获得转基因烟草，具体研究结果如下：1 从山东省种植的马铃薯上分离获得了PVX山东分离物（PVX-SD1），提纯病毒粒体形状为线条状，外壳蛋白亚基的分子量为28.2kD。采用蛋白酶K法提取病毒RNA基因组， 应用RT-PCR扩增目的基因，通过常规的基因克隆法将扩增的CP基因导入pUC19载体，测序。结果表明，CP基因长719bp，可编码238个氨基酸，向NCBI递交序列成功，序列号为AF528555。2 将PVX-SD1的CP基因与 GenBank中报道的15个有代表性的株系或分离物相比较，核苷酸同源性在80.1%～99.7%，氨基酸同源性在89.8%～100%；与欧洲株系UK3仅1个核苷酸不同，同源性为99.7%，氨基酸同源性达100%，暗示着它们与寄主的互作具有同一反应类型，属于X3组。3 采用改进的PVX提纯方法，获得了高产量、高纯度、具有较高生物活性的病毒制品。用提纯的病毒对家兔进行免疫，获得了特异性强、效价高的马铃薯X病毒抗血清，效价为1/2048，可用于植物马铃薯X病毒病害诊断和分析。<WP=6>4 通过随机取样和间接ELISA对山东省PVX田间侵染率进行调查，结果表明，田间带毒率为15%—29%，且常表现与其他病毒混合侵染。5 克隆了非翻译的PVX CP基因，构建了植物双元表达载体，采用冻融法将重组克隆导入根癌农杆菌LBA4404，利用农杆菌介导的叶盘转化法获得转基因烟草，对其进行接种攻毒筛选，得到抗病植株11株，提取烟草总DNA，对抗病与感病植株进行PCR初步鉴定，表明目的基因已经整合到烟草染色体上，进一步的分析在进行中。