体外诱导人羊膜上皮细胞分化为结膜上皮样细胞的实验研究

来源 :暨南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sky_fly2005
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目的:建立体外培养人羊膜上皮细胞(HAECs)和兔结膜上皮细胞的方法,通过将两种细胞共培养,观察并检测是否能将人羊膜上皮细胞诱导分化为结膜上皮样细胞。方法:①分别采用酶消化法和组织块法获得HAECs和兔结膜上皮细胞,并对培养的细胞进行形态学观察;②将HAECs和兔结膜上皮细胞在Transwell非接触共培养系统中共培养10天,以诱导HAECs分化;③通过倒置显微镜和原子力显微镜对诱导前后的HAECs进行形态学及超微结构比较,对诱导前后的HAECs进行PAS染色、HE染色,免疫荧光法检测诱导前后HAECs中CK4、MUC4、MUC5AC的表达,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测分化细胞MUC4、MUC5AC mRNA的表达。结果:共培养后的人羊膜上皮细胞和兔结膜上皮细胞形态较为相似,诱导后的HAECs中可见少量PAS阳性细胞,细胞免疫荧光法检测到诱导后HAECs中CK4、MUC4、MUC5AC呈阳性表达,qRT-PCR检测到分化后细胞MUC4、MUC5AC mRNA表达水平较诱导前上调。结论:HAECs在与兔结膜上皮细胞共培养诱导条件下,可以向结膜上皮样细胞和杯状细胞转分化。
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