【摘 要】
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目的：胞膜窖(caveolae)是细胞膜表面的微小凹陷区域,窖蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)是胞膜窖的主要结构蛋白。既往研究报道指出Cav-1参与了缺血性脑卒中后细胞信号传导的调节,对
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目的：胞膜窖(caveolae)是细胞膜表面的微小凹陷区域,窖蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)是胞膜窖的主要结构蛋白。既往研究报道指出Cav-1参与了缺血性脑卒中后细胞信号传导的调节,对中枢神经系统具有保护作用,但是这一保护机制目前仍不清楚。本研究旨在探讨Cav-1对体外培养的大鼠星形胶质细胞糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)损伤的影响极其作用机制。方法：原代培养出生24 h内的SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞,建立OGD损伤模型,将细胞分为对照组和OGD组,OGD组给予星形胶质细胞6h的OGD和24 h的再灌注损伤。用免疫荧光的方法检测星形胶质细胞Cav-1表达,实时荧光定量PCR和Western blot的方法检测星形胶质细胞OGD后24 h Cav-1表达的变化。根据小干扰RNA (small interference RNA, siRNA)的原理,将Cav-1 siRNA转染入星形胶质细胞,抑制Cav-1在星形胶质细胞中的表达,或给予外源性窖蛋白-1脚手架区肽段(caveolin-1 scaffolding domain peptide, C1-SD82-101)增强细胞中Cav-1的表达后,采用细胞计数试剂盒-8 (cell counting kit-8, CCK-8)的方法检测OGD损伤前后星形胶质细胞的存活率,采用Western blot的方法检测细胞中细胞外信号调节激酶1/2 (extracellular signal-regulated kinase 1/2, ERK1/2)及磷酸化细胞外信号调节激酶1/2 (phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2, pERK1/2)的水平。使用MEK抑制剂(U0126)抑制细胞中ERK1/2信号通路后采用CCK-8的方法检测星形胶质细胞存活率。结果：Cav-1在大鼠大脑皮质星形胶质细胞普遍表达。与对照组相比,OGD组星形胶质细胞Cav-1表达量下降(P<0.05)。抑制星形胶质细胞中Cav-1的表达后,与非OGD组相比,OGD组星形胶质细胞存活率下降(P<0.05)。给予外源性C1-SD82-101(10uM)增强星形胶质细胞内Cav-1的表达后,与对照组相比,OGD组星形胶质细胞存活率升高(P<0.05)。同时我们发现,给予外源性C1-SD82-101组与未给予C1-SD82-101组相比,OGD后细胞存活率升高,并且细胞内pERK1/2表达明显升高,然而给予MEK抑制剂(U0126)后,Cav-1对星形胶质细胞的保护作用不再存在。结论：Cav-1对SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞存在保护作用,这一保护作用机制可能与Cav-1参与了OGD后星形胶质细胞ERK1/2信号通路的调节有关。
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