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研究背景和目的：每位女性都会经历绝经,其中大部分会出现绝经相关症状,这影响了中老年女性的健康并显著降低了她们的生活质量。到目前为止,激素补充治疗仍是治疗绝经相关症状和预防骨质疏松症等最有效的方法。然而,激素补充治疗的安全性问题,如乳腺癌和卵巢癌等,仍是困扰医生和患者的重要问题。WHI研究结果提示,使用结合雌激素和醋酸甲羟孕酮的联合方案组比单用雌激素分支的乳腺癌风险要高,而法国E3N研究提示,乳腺癌风险的增加与使用的孕激素种类有关系。传统观点认为孕激素通过细胞核的孕激素受体(PR)发挥作用,而PR通常介导抗增殖作用,不能解释上述临床的结果。MWS研究认为激素补充治疗时卵巢癌的风险也会增加。近年来发现PGRMC1存在于多种组织中,并且在多种肿瘤组织和细胞系中高表达,包括乳腺癌和卵巢癌,PGRMC1相关的孕激素结合可能与肿瘤有关。因此,本研究致力于研究雌孕激素对PGRMC1高表达的不同乳腺癌和卵巢癌细胞系的增殖作用,并对可能机制进行初步的探讨。实验方法：我们对不同的乳腺癌细胞系(MCF7、MDA231-MB-231)和卵巢癌细胞系(SKOV3和OVcar29)进行PGRMC1基因的转染,其中MCF7细胞稳定转染了PGRMC1-3HA野生型以及突变型(PGRMC1S56A, Y179F, Y138F, Y179F/S180A),并与转染了空质粒的MCF7细胞进行了对照,其他细胞系稳定转染了野生型PGRMC1-3HA和空质粒。随后对转染的各种细胞系进行了不同浓度(10-9M,10-8M,10-7M和106M)的多种不同孕激素(NET、 MPA、P4、NOM、DY、DRSP、LNG和CMA等)与不同浓度梯度(10-14M,10-12M和10-10M)的雌二醇的单独刺激,或者雌孕激素联合或序贯刺激,观察各种不同方案的刺激作用是否有差异。为了探讨PGRMC1的作用机制,我们采用反向蛋白芯片方法检测了信号转导通路中15种常见的下游蛋白的表达情况,并采用了western blot进行验证；我们也采用了受体拮抗剂(包括ER拮抗剂氟维司群、PR拮抗剂RU486和PGRMC1拮抗剂AG205)对高表达PGRMC1的MCF7细胞进行阻断实验,以探讨受体相关的可能机制。实验结果：对比PGRMC1高表达的MCF7细胞(MCF7-WT12)与MCF7EVC细胞的结果发现,雌孕激素对细胞的作用呈现浓度依赖作用。低浓度的孕激素不会促进EVC细胞的增殖,高浓度(10-6M)的MPA、DRSP、DY、LNG和CMA促进转染其增殖约40-50%。而对MCF7-WT12细胞的增殖作用,NET最明显,在10-9M时,即可促进其增殖,在10-7M时达峰值200%左右,而10-7M和10-6M的MPA、DRSP、DY和LNG以及10-6M的CMA均可以促进其显著增殖1-2倍,显著高于MCF7EVC细胞,P4和NOM不会促进任何细胞的增殖。三种浓度的E2均没有促进EVC的明显增殖,10-10M的E2显著促进了WT12细胞的增殖,而10-14M和10-12M的E2不会促进其增殖。雌孕激素联合或者序贯方案都不会促进MCF7EVC细胞的增殖。在雌孕激素的联合或序贯方案对细胞进行刺激时发现,在10-10M E2联合或序贯NET时,WT12的增殖作用与单独使用1010M E2相似,而当使用低浓度的雌激素(10-12M和10-14M)的联合方案时,其增殖增加约170%,与单独使用NET的结果相似,在序贯方案中其增殖作用较联合方案要弱。而E2与P4或者NOM联合或序贯时,与E2单独刺激时增殖程度相似。对转染了突变型PGRMC1(S56A、Y179F、 Y138F、 Y179F/S180A)的MCF7细胞进行了相应的刺激发现,各种雌孕激素对细胞的增殖作用减弱,尤其是Y179F/S180A增殖作用明显减弱,而Y138F仅在地屈孕酮和屈螺酮的作用下有大约50%的增殖。MCF7细胞转染PGRMC1后其ERK1/2表达水平降低了40%。受体拮抗剂的阻断实验发现只有氟维司群可以完全阻断EP诱导的增殖作用,AG205可以对EP诱导的细胞的增殖有部分抑制作用,而RU486并没有抑制细胞的作用。对转染PGRMC13HA前后的MDA231-MB-231、SKOV3和OVcar29细胞的刺激试验均没有发现雌孕激素相关的增殖作用。结论：在MCF7细胞中PGRMC1介导了雌孕激素依赖的增殖作用。不同合成孕激素对PGRMC1高表达细胞的增殖作用不同,呈浓度依赖性,而P4和NOM在各种方案中均呈中性作用。在使用可以促进细胞增殖的药物如NET时,增殖作用主要取决于E2的浓度,低浓度E2的序贯方案似乎优于联合方案。转染了突变型PGRMC1对MCF7的增殖作用较野生型PGRMC1减弱。PGRMC1的增殖作用可能需要ER的介导。但是,PGRMC1不会增加雌孕激素刺激时MDA-MB-231、SKOV3和OVcar29等细胞的增殖。因此,PGRMC1可以促进激素补充治疗时细胞的增殖,但取决于细胞的种类和特征,不同孕激素对细胞的增殖作用不同,呈浓度依赖性,其增殖作用主要在雌激素浓度较低增殖作用不明显时,HRT时可以选用呈中性的P4或者NOM。PGRMC1的具体作用机制尚不明确,可能ER参与了其作用,需要进一步的研究。