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洋葱假单胞菌脂肪酶是重要的工业酶制剂之一,可以催化脂解、酯交换、酯合成等反应,广泛应用于生物能源(生物柴油合成)、油脂加工、医药等行业,但目前国内尚无相关产品。本文在已拥有的高产脂肪酶洋葱假单胞菌的基础上,对其产酶条件及脂肪酶分离纯化工艺进行了优化研究,主要结果如下:首先采用了单因子实验筛选出产酶的最适碳源和氮源,然后结合Plackett-Burman设计和响应面(response surface methodology,RSM)法对洋葱假单胞菌产脂肪酶条件进行系统优化。单因子试验确定洋葱假单胞菌G-63产脂肪酶的最适碳源、氮源分别为:麦芽糖和豆饼水解液,其最佳装液量为30 mL/250 mL三角瓶。在此基础上,通过Plackett-Burman设计,对影响其产酶的11个相关因素进行了评估,筛选出具有显著效应的三个因子:橄榄油乳化液浓度、豆饼水解液浓度及初始pH值。然后拟合这三个主效因子关于发酵液酶活力的一阶线性模型,再沿着一阶模型指定的路径进行最陡爬坡试验,逼近以上三个因子的最大响应区后,采用响应面分析法,确定出橄榄油乳化液、豆粉水解液的最佳浓度和最佳初始pH值分别为4.34%,1.96%和8.4。优化后液体发酵培养基中脂肪酶活力提高到44.39 U/mL,比未优化的初始酶活13.45 U/mL提高了3.3倍。在优化条件的基础上,选用不同的油脂作诱导剂,考察了油脂对发酵的影响,结果表明,可以使用豆油或猪油替代橄榄油作为脂肪酶诱导剂,可进一步降低脂肪酶生产成本。采用了PEG/磷酸盐双水相体系工艺从洋葱假单胞菌G-63发酵粗酶液中分离纯化脂肪酶。研究了体系中PEG平均分子量、PEG、磷酸盐、NaCl溶液浓度以及pH对脂肪酶分配系数K、回收率Y、纯化效率F及分相时间的影响。结果表明:在PEG 2000、磷酸盐、NaCl质量分数分别为10%,15%,1%,且pH为8.0时,脂肪酶的回收率最高,达到87.25%,此时的分配系数为4.36,纯化因子为3.98。