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目的 支气管哮喘是嗜酸性粒细胞,肥大细胞,淋巴细胞等多种炎性细胞参与的呼吸道慢性炎症。外界变应原通过变态反应,激活一系列免疫反应细胞,释放炎性介质,形成哮喘的炎症反应和气道高反应性。此外,神经系统也能通过产生神经因子促进炎症形成,参与哮喘发作。 NF-κB(核因子κB)是一组重要的核转录因子,它调节许多细胞因子的基因表达,增加这些基因的产物数量。正常情况下,NF-κB与抑制因子IκB结合以无活性的形式存在于细胞浆中,当受到外界刺激(包括炎性介质、病毒及抗原等)后被激活,转位进入细胞核,与相应的炎性介质基因的启动子/增强子结合,促进这些介质的基因表达。目前,临床多应用激素治疗哮喘,但其机制是否与激素对NF-κB的抑制作用有关还需进一步的证实。本实验通过对哮喘后和激素治疗后豚鼠小气道壁内淋巴细胞和C7-T5脊神经节神经元NF-κB活性的研究,探讨NF-κB在哮喘发作过程中的作用及激素治疗哮喘的作用机制。 方法 1.哮喘模型的建立 将24只豚鼠(200-220克,均为雌性)随机分为4组。生理盐水组(4只)腹腔注射1ml生理盐水,10日后雾化吸入生理盐水;单纯致敏组(4只)腹腔注射1ml10%OVA(OVA与Al(OH)3为1:1),10日后雾化吸入生理盐水(上述两组作为对照组);哮喘组门只)腹腔注射lrnl 10%的OVA溶液,10日后雾化吸人1%OVA(不含川(OH入人待豚鼠出现哮喘反应后立即终止吸人,待自然缓解;激素组难只)操作同哮喘组,在哮喘后腹腔注射地塞米松p 人各组豚鼠雾化吸人每日一次,川日后处死。 2.取材,包埋,切片 常规灌流固定后,取下 C,-Ts脊神经节及肺组织,放人 4%PFA中后固定24小时后,移人30%的蔗糖缓冲液中至标本沉降后,取出标本进行修剪。OCT包埋后冰冻切片机切片,片厚12卜m。切片干燥后进行免疫组化染色。 3.免疫组化染色 应用免抗鼠 NF-KB抗体(抗 P65抗体,用 0.5%TritonX-100稀释为 1:200)和 SABC试剂盒及 DAB进行免疫组化染色。 4.统计学处理 用Luzex-F实时图象分析系统对实验结果进行灰度值测量,用SPSS统计软件对数据进行处理分析。 结 果 1.生理盐水组 小气道的上皮完整,管壁内有少数散在的淋巴细胞,分布于淋巴细胞胞浆内的NF—KB免疫阳性反应物质多于胞核。C,-T。脊神经节神经元NF-KB免疫阳性反应物质几乎全都分布于胞浆中,而胞核中的阳性物质很少甚至没有。经统计该组淋巴细胞和神经元核与浆染色程度差异显著河<O.05人 2.单纯致敏组 小气道的上皮比较完整,有少量淋巴细胞分布在管壁内,淋巴细胞胞浆中的NF-KB免疫阳性反应物质多于胞核。C,-Ts脊神经节神经元的NF-KB免疫阳性反应物质几乎全都分布于胞浆中,而胞核中的阳性物质很少甚至没有。经统计该组淋巴细胞和神经元核与浆染色程度有显著性差异(P<0. ·2·05)。 3.哮喘组 小气道的上皮不完整,管壁内乃至气道周围有大量淋巴细胞,NF-KB阳性反应物质不均匀地分布于淋巴细胞内,胞核的阳性染色深于胞浆。分布于C,-Ts脊神经节神经元胞核内的NF-KB免疫阳性反应物质多于胞浆。经统计该组淋巴细胞和神经元的核与浆染色程度差异显著什<0.05人此外,该组小气道壁内淋巴细胞总数明显高于对照组(P<0.05人 4.激素组小气道上皮不完整,管壁内有少量的淋巴细胞,淋巴细胞内NF-KB阳性反应物质分布不均匀,胞浆阳性染色深于胞核。另外,分布于C,-T。脊神经节神经元胞浆内的NF-KB免疫阳性反应物质多于胞核。经统计该组淋巴细胞和神经元的核与浆染色程度差异显著神<0.05人此外,该组小气道壁内淋巴细胞总数明显少于哮喘组(P<O.05人但与对照组比较则无显著性差异(P>0.05)。 结 论 *哮喘豚鼠肺内小气道壁中的淋巴细胞和C,-T。脊神经节神经元内NF—KB会产生由细胞浆向细胞核的移位,核内的NF一KB可以促进炎症因子基因的转录,参与哮喘的发病机制。 2.抑制 NF一阳的活性可能是激素治疗哮喘的作用机制之 3.哮喘豚鼠C,-TS脊神经节神经元内NF-KB的过度激活可能会促进某些神经肽类物质的合成,从而参与哮喘的发病机制。