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流感病毒能够引起急性呼吸道传染性疾病，每年冬春两季均可能发生季节性流感，对人类健康产生较大威胁。流感发病率高，死亡率低，但所造成的死亡人数总和却不容小觑。流感病毒属正粘病毒科，为带有节段、单股负链RNA基因组的包膜病毒。流感病毒可分为甲、乙、丙三型，核蛋白(NP)和基质蛋白(M1)的抗原性不同是其分类依据。甲型流感病毒又分为很多血清亚型。目前已发现甲型流感病毒的血凝素(HA)有18个亚型(HA1～HA18)，神经氨酸酶(NA)有11个亚型(NA1～NA11)，组合后能够产生很多不同亚型的病毒株。甲型流感病毒的自然储存宿主要包括野生水禽和蝙蝠。NA、M2离子通道蛋白和HA是甲型流感病毒外膜上的3种膜蛋白，是流感病毒侵染细胞不可缺少的成分。 流感病毒在复制过程中，RNA聚合酶缺乏校对功能，因而具有较高的突变率，对病毒抗原性、致病性及跨种传播等都有重要影响。对人季节性流感病毒而言，往往每隔几年便会发生抗原漂移，给人类健康带来很大威胁，同时也使得我们面临更加严峻的流感病毒监测考验。目前已有的流感病毒检测方法主要有病毒分离、免疫学检测以及分子生物学检测等。本文建立了PCR-ELISA以及重组酶聚合酶扩增技术(RPA)两种检测方法来检测流感病毒。PCR-ELISA检测方法结合了免疫学和分子生物学检测方法，首先根据甲型流感病毒M基因(M)，H1N1、H3N2和H7N9亚型的HA基因(H1-HA、H3-HA、H7-HA)，NA基因(N1-NA、N2-NA、N9-NA)，以及乙型流感病毒的NS基因(B-NS)的保守序列设计引物和探针，在引物与探针上分别标记生物素与地高辛，在PCR过程中将生物素标记于扩增产物中，通过杂交进一步标记上地高辛，最后通过酶联免疫吸附反应(ELISA)判断结果。M、H1、H3、H7、N1、N2、N9、B-NS八个基因片段所能检测的最低拷贝数分别为:1.43×103，8.67×102，3.86×103，1.04×102，8.06×101，1.99×102，8.80×103，5.45×103拷贝/μl。其敏感度是普通PCR的10-100倍，且不同流感病毒亚型之间、不同种属病毒之间均不存在交叉反应现象。另外还检测了127份临床标本，本文所建立的PCR-ELISA方法的检测结果与病毒分离完全一致。RPA技术借助于重组酶、单链结合蛋白以及DNA聚合酶，在常温下便可实现对目的片段的扩增，最后通过标记的探针或凝胶电泳等技术即可实现对样本的监测。本实验经过大量引物的筛选工作，得到了三对分别针对甲型流感病毒的M、H1-HA以及乙型流感病毒的NS基因的引物与探针，特异性好，敏感性高，所能检测的最低拷贝数分别为:1.43×103，8.67×102，5.45×102。此方法简便快捷，得到检测结果的时间不超过20min，甚至在10min内便能得到检测结果，且该方法仅需要一个可随身携带的荧光检测仪器，便于实地检测。 抗流感病毒药物在临床治疗流感上发挥着重要作用。本研究以扎那米韦为阳性药物，运用酶联免疫吸附实验(ELISA)和三磷酸腺苷(ATP)荧光检测技术，建立了基于细胞培养的天然化合物抗流感病毒体外筛选模型，以便于在体外快速地筛选有抗流感病毒活性的化合物。 综上所述，本实验建立了敏感、特异、快速的流感病毒分子检测方法以及天然化合物体外筛选模型，为流感病毒的体外诊断以及化合物筛选提供了新的方法。