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多糖是由十个及以上单糖以糖苷键结合而成的天然大分子物质。研究发现，多糖具有增强免疫、抗氧化、抗衰老和抗肿瘤等生物活性，多糖的诸多生物活性与一级结构和高级结构密切相关，一级结构是高级结构的基础，而单糖的组成又是多糖一级结构的基础，因此多糖中单糖组成的分析是研究多糖结构的基础。目前，关于多糖中单糖组成的分析方法文献报道较多，但采用不同的分析方法测定同一种多糖中单糖组成的报道少。因此，本文采用三种色谱法-柱前衍生化气相色谱法、柱前衍生化高效液相色谱法和高效液相色谱-蒸发光散射法测定肉苁蓉多糖中单糖的组成，为多糖中单糖组成分析方法的研究与应用提供参考。 1、研究柱前衍生化气相色谱法测定肉苁蓉多糖中单糖的组成。采用单因素实验，考察水解酸浓度、温度和时间对肉苁蓉多糖水解的影响；采用柱前衍生化气相色谱法测定肉苁蓉多糖中单糖的组成。仪器条件:GC2010气相色谱仪，DB-5毛细管柱(30 m×0.32 mm，0.5μm)，检测器为FID；氢气和空气的流速分别为37 mL/min和370 mL/min，氮气流速2 mL/min；升温程序:130℃保持5 min，4℃/min程序升温至240℃保持5 min；气化室温度为280℃；分流比为15:1；检测器温度300℃，进样量为1μL，肌醇为内标物。结果表明，肉苁蓉多糖水解的最佳条件为硫酸浓度3.0 mol/L，水解时间8 h和水解温度110℃；鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖以及半乳糖在0.50-5.0 mg/mL范围内线性关系良好，检出限为0.5 mg/L，相邻两峰鼠李糖和阿拉伯糖、阿拉伯糖和木糖、木糖和甘露糖、甘露糖和葡萄糖以及葡萄糖和半乳糖的分离度分别为1.02、1.05、5.64、1.00和1.17。各单糖6次测定的精密度、重复性和稳定性的RSD分别为0.92-4.68％、0.92-1.77%和1.61-3.61%，加样回收率为99.3-100.3%，精密度较高，重复性、稳定性和回收率较好；肉苁蓉多糖主要由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成，其摩尔比为2.01:5.72:2。此法样品用量少、重复性好和检出限低，但本文方法不适用于多糖中含糖醛酸等酸性单糖组成的分析。 2、研究柱前衍生化高效液相色谱法测定肉苁蓉多糖中单糖的组成。与硫酸法水解多糖相比，三氟乙酸不仅可缩短多糖的水解时间，且水解后可用减压蒸馏除去残留的酸，对后续所用液相色谱柱的损伤小，因此本章采用三氟乙酸水解肉苁蓉多糖。采用单因素实验，考察水解酸浓度、温度和时间各因素对三氟乙酸水解肉苁蓉多糖以及PMP甲醇浓度、温度和时间衍生化条件的影响；采用高效液相色谱法测定肉苁蓉多糖中单糖的组成。仪器条件:Agilent1200色谱分析系统，紫外检测器，色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6×250 mm，5μm)，流动相为醋酸铵缓冲液(pH5.5):甲醇=78:22，检测波长245 nm，柱温30℃，进样量5μL，等梯度洗脱。选用标准单糖木糖为内标物。结果表明，肉苁蓉多糖水解的最佳条件为三氟乙酸2.0 mol/L，水解时间4 h和水解温度120℃；衍生化的最优条件为PMP甲醇溶液0.5 mol/L，反应时间40 min和反应温度70℃；甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和木糖在0.5-5.0 mg/mL范围内线性关系良好，检出限为50 mg/L，相邻两峰甘露糖和鼠李糖、鼠李糖和葡萄糖、葡萄糖和半乳糖、半乳糖和阿拉伯糖以及阿拉伯糖和木糖分离度分别为1.99、4.45、1.98、2.57和3.43，分离度均大于1.5，相邻两峰完全分离。各单糖6次测定的精密度、重复性、稳定性的RSD分别为0.95-4.93%、1.15-1.97%和1.81-3.72%，加样回收率为99.2-100.9%，精密度较高，重复性、稳定性和回收率较好；肉苁蓉多糖主要由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成，其摩尔比为1.98:5.61:1.95。此法分离效能高、重复性好，选用PMP作衍生化试剂，反应条件温和、反应时间短，可用于多糖中还原单糖组成的测定。 3、研究高效液相色谱-蒸发光散射法测定肉苁蓉多糖单糖组成。采用单因素实验，考察漂移管温度、载气流量对仪器工作条件的影响，采用高效液相色谱-蒸发光散射法测定肉苁蓉多糖中单糖的组成。本章采用三氟乙酸水解肉苁蓉多糖，仪器条件:Agilent Technologies色谱分析系统，色谱柱为Hypersil NH2(4.6 mm×250mm，5μm)，柱温40℃；流动相:A乙腈，B水，梯度洗脱程序:0-1 min，80%A；1-5 min，80%A-90%A；5-6 min，90%A；6-20 min，90%A-80%A；20-42 min，80%A；流速1 mL/min；进样量10μL；选用标准单糖木糖为内标物。结果表明，最佳条件为漂移管温度为60℃，载气为高纯氮气，载气流速为1.2 mL/min，增益为1。鼠李糖、葡萄糖、甘露糖和木糖在进样量15-480 mg/L范围内线性关系较好，阿拉伯糖和半乳糖在进样量10-320 mg/L范围内线性关系较好，检出限为1.0-1.5 mg/L，相邻两峰鼠李糖和葡萄糖、葡萄糖和阿拉伯糖、阿拉伯糖和甘露糖、甘露糖和木糖以及木糖和半乳糖的分离度分别为1.14、1.40、1.69、1.25和2.90，各单糖的6次的精密度、稳定性和重复性RSD分别为0.65-1.69%、1.16-4.16%和1.83-1.96%，加样回收率为96.8-98.9%，精密度较高，重复性、稳定性和回收率较好。肉苁蓉多糖主要由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成，其摩尔比为2.03:5.66:1.92。高效液相色谱-蒸发光散射法无需衍生化，操作简单、精密度高、检测限较低，适用于测定多糖中所有种类的单糖。 综上所述，在上述三种色谱方法中，高效液相色谱-蒸发光散射法因无需衍生化，操作简单、精密度高、检测限较低，尤其适用于测定多糖中所有种类的单糖，适用范围广，是测定多糖中单糖组成较为通用的方法。