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目的：利用基因工程技术和生物学方法构建表达RP215-VH重组单域抗体，对其进行免疫活性鉴定及体外抗肿瘤活性的研究，以期为临床提供有潜在价值的抗肿瘤药物。方法：1.从质粒pGEX-RP215-VH切下RP215-VH基因，连接到pET32a(+)，构建出表达质粒pET32a(+)-RP215-VH。2.表达质粒转化BL21（DE3）感受态，IPTG诱导表达，超声破碎大肠杆菌，收集上清，Ni柱纯化，SDS-PAGE及Western-blot鉴定产物。3．利用免疫荧光（immunofluorescence staining, IF）、免疫印迹(Western-blot）、酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)及竞争酶联免疫吸附试验确定RP215-VH单域抗体对乳腺癌细胞（如MB231、MCF7、BT549、SK-BR-3、MB468）表面的CA215抗原是否有免疫活性。4．通过CCK8细胞毒实验、流式细胞术测定细胞周期及凋亡，分析RP215-VH单域抗体对乳腺癌细胞是否具有体外抗肿瘤生物活性。结果：1.重组质粒基因测序结果是正确的，表明pET32a(+)-RP215-VH质粒成功构建。2. SDS-PAGE及Western-blot鉴定，结果均可见明显约31KD大小目的条带，表明RP215-VH成功表达。3.免疫荧光结果显示，RP215-VH单域抗体在乳腺癌细胞（MB231、MCF7、BT549、SK-BR-3、MB468）中，均可见红色荧光，而在正常乳腺细胞HBL100及PBS空白对照组中均未见红色荧光。4. Western-blot活性鉴定结果显示，在乳腺癌细胞(MB231、MCF7、BT549)，实验组均可见25-75KDa大小的目的条带，0.1%BSA对照组未见条带。5. ELISA活性鉴定实验（MB231、MCF7、BT549、SK-BR-3）结果中，1/25-1/200稀释浓度的实验组OD值均高于空白对照组，数据具有统计学意义（P<0.05）。6.竞争酶联免疫吸附试验（BT549）中单域抗体稀释比为1/25-1/900时，竞争抑制率分别是53.9%、55.6%、31.4%、10.6%、11.3%、4.6%。7. CCK8细胞毒实验中，在12h时实验组OD值低于空白对照组，但差异未达到统计学意义（P>0.05）。8.流式测定乳腺癌细胞周期及凋亡，实验组G0/G1期细胞比例从48.6%增加至63%，数据有统计学意义(P<0.05)；凋亡率实验组高于空白对照组，差异未达到统计学意义（P>0.05）。结论：我们成功构建并表达了RP215-VH抗体，且该抗体能与乳腺癌细胞表面抗原CA215特异性相结合，表明其具有抗原抗体免疫活性。通过功能实验，我们发现RP215-H能使乳腺癌MB231细胞周期停滞在G0-G1期。由于RP215-VH能准确定位肿瘤细胞表面CA215抗原，该抗体可能可以应用于肿瘤的诊断及靶向治疗中。