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目的: 探讨丹皮酚对四氯化碳诱导的急性肝损伤和慢性肝纤维化的保护作用及其机制。 方法: 1.丹皮酚对四氯化碳诱导的急性肝损伤的保护作用 将雄性C57BL/J小鼠随机分为6组,即空白组、丹皮酚对照组、急性肝损伤模型组,丹皮酚低、中、高剂量干预组(30,100,150 mg/kg)。丹皮酚对照组和丹皮酚剂量组按每隔8 h,连续3次灌胃给药,空白组和模型组均给予等量生理盐水灌胃;末次给药30 min后模型组和丹皮酚剂量组按小鼠体重腹腔注射5μL/g,10%四氯化碳-油溶液。造模24 h后收集小鼠血清和肝脏组织标本,并且测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨基酸基转移酶(aspartate aminotransferase,AST);苏木精-伊红染色观察肝损伤情况;Caspase-3水平检测评价肝细胞凋亡情况;测定肝组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)含量对肝脏抗氧化能力进行评价。酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)检测血清中TNF-α、IL-6水平。 2.丹皮酚对四氯化碳诱导的肝纤维化的影响 将雄性 C57BL/J小鼠随机分为4组,即空白组、丹皮酚对照组、慢性肝损伤模型组,丹皮酚干预组。模型组和丹皮酚干预组按小鼠体重腹腔注射5μL/g、10%四氯化碳-油溶液,每周两次;造模一周后,丹皮酚对照组和丹皮酚干预组按100 mg/kg每天灌胃给药一次,空白组与模型组给予同体积生理盐水。7周后收集小鼠血清和肝脏组织标本。测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶;苏木精-伊红染色观察肝脏病理学变化;天狼星红染色、马森染色、肝组织羟脯氨酸含量测定对肝纤维化程度进行评价;检测肝组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量测定肝脏的抗氧化能力;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)检测肝脏中TNF-α、IL-6含量及TGF-β活性;逆转录定量聚合酶链式反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测肝组织中纤维化相关分子和TGF-β的mRNA表达;免疫印迹法分析肝组织中纤维化相关分子以及TGF-β相关蛋白p-Smad3的表达。 结果: 1.四氯化碳诱导的急性肝损伤模型 (1)与空白组相比,模型组血清中转氨酶ALT、AST升高,苏木精-伊红染色显示小鼠肝组织中央静脉周围肝细胞排列紊乱;肝组织中caspase-3活性增加;MDA含量升高,SOD、GSH-PX、GSH水平降低;血清中TNF-α、IL-6明显升高。 (2)与模型组相比,丹皮酚干预后血清中ALT、AST活性呈剂量性降低,苏木精-伊红染色显示肝损伤程度明显减轻;caspase-3活性降低;肝组织中MDA活性降低,提高SOD、GSH-PX、GST水平;血清中TNF-α、IL-6降低。 2.四氯化碳诱导的慢性肝纤维化模型 (1)与空白组相比,模型组小鼠血清中ALT、AST活性升高,苏木精-伊红染色显示模型组小鼠肝小叶排列紊乱,炎性细胞浸润明显;天狼星红、马森染色和肝组织羟脯氨酸含量测定结果显示肝纤维化程度严重;肝组织MDA活性升高,SOD、GSH-PX、GSH水平降低;血清中TNF-α、IL-6明显升高;小鼠肝脏中肝纤维化相关分子的mRNA和蛋白表达水平升高;肝组织中TGF-β mRNA水平及其活性均显著上升;TGF-β相关蛋白p-Smad3表达升高。 (2)与模型组相比,丹皮酚干预组小鼠血清中转氨酶活性降低,苏木精-伊红染色显示肝细胞大部分排列完整,炎性细胞浸润减少;天狼星红、马森染色和肝组织羟脯氨酸含量测定显示肝纤维化程度降低;肝组织MDA活性降低,SOD、GSH-PX、GSH水平升高;血清中TNF-α、IL-6含量降低;小鼠肝脏中肝纤维化相关分子的mRNA和蛋白表达水平下降;肝组织中TGF-βmRNA水平及其活性明显降低;TGF-β下游通路中信号分子p-Smad3表达减少。 结论: 1.丹皮酚对四氯化碳所致的急性肝损伤具有保护作用,其作用机制可能与抗脂质过氧化,抑制肝细胞凋亡以及减少炎症细胞因子释放有关。 2.丹皮酚能减轻四氯化碳所致的肝纤维化,该作用机制可能与抑制TGF-β/Smad3信号有关。