论文部分内容阅读
贾第虫是一种呈全球性分布的常见致腹泻肠鞭毛原虫,具有广泛的宿主范围,可引起包括人在内的多种脊椎动物腹泻,可通过粪-口途径传播或通过污染的食物和水源传播。自20世纪70年代以来,世界各地均发生了本病流行或暴发性流行,目前已将贾第虫列入危害人类健康的10种主要寄生虫病之一。本研究目的为了解河南省部分地区人贾第虫感染情况,并对获得的贾第虫分离株进行分子遗传特性研究,从而分析人贾第虫病的感染来源。2007至2008年,用卢戈式碘液染色法对河南省人民医院临床病人、林州地区0~15岁儿童、开封地区两家医院住院病人贾第虫病的流行情况进行了调查。共检测7519份粪便样品,发现23个贾第虫分离株,总感染率为0.31%(23/7519)。0-6岁(0.46%)与7-10岁(1.28%)这两个年龄段的人感染率最高,而21~40岁、41~60岁和大于60岁感染率相对较低(0.34%, 0.11%,和0.13%),11-20岁感染率为零,不同年龄段人贾第虫感染率存在显著差异。从性别上看,男性的感染率为0.36%(14/3932),女性的感染率为0.25%(9/3587) (P > 0.05)。根据GenBank中贾第虫TPI基因序列设计合成一套引物,对贾第虫基因组DNA进行巢式PCR扩增,并对退火温度进行优化,成功扩增出约530bp长的目的片段,而其它3种寄生虫DNA样本均未出现此条带,说明引物对贾第虫基因组DNA的检测具有高度的特异性。所建立的巢式PCR方法,可为贾第虫病的临床诊断和流行病学调查提供有用的工具。利用建立的巢式PCR扩增方法对23个阳性分离株进行了扩增,共扩增出20个样品,随后成功测序出18个分离株。序列分析表明18个分离株分属2个集聚体,即12个集聚体A和6个集聚体B。亚型分析显示12集聚体A中8个为A-I,4个为A-II。相对而言,6个集聚体B为6个新的亚型,命名为B1-B6。种系发育分析进一步验证了序列比对分析结果,在种系发育分析树上,18个分离株形成2个群,一群为集聚体A,另一群为集聚体B;而且集聚体A-I亚型和A-II亚型分属不同的分支。研究结果表明,河南省人贾第虫以集聚体A-I亚型为主,这与国外的数据不相一致。另外,在三个调查地区,林州的分离株均为集聚体A且A-I居多,开封则以集聚体B为主;而郑州的亚型分布相对多样。这一结果表明贾第虫基因型和亚型可能存在地区性分布差异。