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缺氧诱导因子1α（HIF1α）是糖酵解途径中的关键调控基因[1-4],而人肝X受体α（LXRα）则是脂质代谢途径中的关键调控基因[5-8]。从能量代谢角度而言,M1型巨噬细胞主要依赖糖酵解,M2型巨噬细胞则主要依赖脂质代谢[1,9]。因此,通过分析HIF1α和LXRα的转录/蛋白表达水平,有助于了解巨噬细胞极化表型[10]。在免疫相关弥漫性肺泡出血症（diffuse alveolar hemorrahge,DAH）动物模型中研究发现,其体内巨噬细胞的HIF1αm RNA高表达,而LXRα及其下游基因ABCA1 m RNA则低表达,反映了该模型动物体内的巨噬细胞能量代谢以糖酵解为主,而脂质代谢受抑制,也间接提示巨噬细胞M1/M2极化失衡参与肺泡出血的发病[10]。目前,在免疫相关DAH临床病例中尚缺乏相关研究。鉴于此,本研究拟在免疫相关DAH患儿中,通过分析巨噬细胞HIF1α、LXRα的转录及蛋白表达水平,以初步探究HIF1α、LXRα与免疫相关DAH患儿发病的关系。第一部分HIF1α、LXRα在巨噬细胞极化模型中的变化目的研究能量代谢调控基因HIF1α、LXRα在巨噬细胞极化模型中的变化。方法建立人外周血单核细胞来源的巨噬细胞（monocytes derived macrophages,MDMs）模型,分别在无刺激,以及LPS/IFN-γ、IL-4刺激下建立标准的巨噬细胞M0、M1、M2极化细胞模型。实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测各模型组中的HIF1α、LXRαm RNA相对表达量,免疫酶联反应（ELISA）检测各模型组细胞培养上清液中HIF1α、LXRα的蛋白表达水平。结果1.HIF1α转录水平:与M0模型组相比,M1模型组的HIF1αm RNA相对表达量显著增高（P＜0.01）;与M0模型组相比,M2模型组的HIF1αm RNA相对表达量无显著性差异（P＞0.05）;M1模型组、M/2模型组两组间相比,M1模型组的HIF1αm RNA相对表达量也显著增高（P＜0.01）。2.HIF1α蛋白表达水平:与M0模型组相比,M1模型组和M2模型组细胞培养上清中HIF1α的蛋白表达水平均显著降低（P＜0.01）;M1模型组、M2两模型两组相比,细胞培养上清中HIF1α的蛋白表达水平无显著性差异（P＞0.05）。3 LXRα转录水平:与M0模型组相比,M1模型组的LXRαm RNA相对表达量显著增高（P＜0.05）;与M0模型组相比,M2模型组的LXRαm RNA相对表达量显著降低（P＜0.01）;M1模型组、M2模型组两组间相比,M2模型组的LXRαm RNA相对表达量显著降低（P＜0.01）。4.LXRα蛋白表达水平:M0、M1、M2模型组间细胞培养上清中LXRα的蛋白表达水平无显著性差异（P＞0.05）。结论1.在MDMs细胞模型中,HIF1α、LXRα转录水平随巨噬细胞极化会有所改变,其中HIF1α转录水平的测定可能更适于区分M1/M2极化;2.在MDMs细胞模型中,HIF1α、LXRα的转录水平与其细胞培养上清液中的蛋白表达水平变化趋势不一致。第二部分免疫相关弥漫性肺泡出血症免疫微环境对巨噬细胞HIF1α、LXRα转录及蛋白表达的影响目的探究免疫相关DAH患儿外周血以及肺脏免疫微环境对HIF1α、LXRα转录及蛋白表达的影响。方法纳入免疫相关DAH患儿（DAH-S）34例,分为急性出血期（DAH-A-S）和出血间期（DAH-R-S）,同期纳入正常对照组儿童（C-S）14例,均留取血清备用。另纳入免疫相关DAH患儿20例（DAH-B组）及符合标准的对照组儿童（C-B）15例,均行支气管镜获取支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveolar Lavage Fluid,BALF）,离心后留取上清液备用。应用第一部分已建立的MDMs模型,分别用上述纳入对象的血清、BALF上清液进行干预。血清干预后,q RT-PCR检测HIF1α、LXRα、IL-1β、TNFα、MRC1、TGM2 m RNA的相对表达量,ELISA检测细胞培养上清液中HIF1α、LXRα的蛋白表达水平。BALF上清液干预后,q RT-PCR检测HIF1α、LXRαm RNA的相对表达量,ELISA检测细胞培养上清液中HIF1α、LXRα的蛋白表达水平。结果1.血清干预实验中,（1）在转录水平上,与C-S干预组相比,DAH-A-S干预组和DAH-R-S干预组的HIF1αm RNA相对表达量均显著降低（P＜0.01）;与C-S干预组相比,DAH-A-S干预组的MRC1 m RNA相对表达量显著增高（P＜0.01）,DAH-R-S干预组的MRC1 m RNA相对表达量无显著性差异（P＞0.05）;而与C-S干预组相比,DAH-A-S干预组和DAH-R-S干预组的LXRα、IL-1β、TNFα、TGM2 m RNA相对表达量均无显著性差异。（2）在蛋白表达水平上,与HC-S干预组相比,DAH-S干预组细胞培养上清液中HIF1α的蛋白表达水平显著增高（P＜0.05）,DAH-S干预组细胞培养上清液中LXRα的蛋白表达水平则无显著性差异（P＞0.05）。2.BALF上清液干预实验中,与C-B干预组相比,DAH-B干预组的HIF1α、LXRαm RNA相对表达量,及细胞培养上清液中HIF1α、LXRα的蛋白表达水平均无显著性差异（P＞0.05）。结论1.免疫相关DΑH患儿外周血免疫微环境能够下调巨噬细胞HIF1α的转录水平,诱导M2极化。2.尚未发现免疫相关DAH肺脏免疫微环境对巨噬细胞HIF1α、LXRα的转录水平及蛋白表达水平有影响。