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本实验通过对犬细小病毒流行株的分离鉴定，犬瘟热病毒的流行病学调查，犬副流感病毒的分离鉴定以及对三种种毒的优化培养，筛选出了适合于比格犬的免疫佐剂，并对制备的灭活疫苗进行了免疫效果研究。 本试验成功分离了1株犬细小病毒，采用PCR、理化特性检验、HA及HI等方法对其进行了鉴定，并对其编码区全基因序列进行了分析。取临床患出血性肠炎幼犬粪便经无菌处理后同步接种F81猫肾细胞分离病毒，盲传至第四代开始出现典型的细胞病变。该病毒可凝集猪的红细胞，血凝效价为28，可被犬细小病毒单克隆抗体特异性中和而产生血凝抑制现象；病毒效价为105.5TCID50/ml；毒株对氯仿和胰酶不敏感，且耐酸耐热。经病毒理化特性试验及犬细小病毒单克隆抗体的血凝抑制鉴定其为犬细小病毒，通过PCR检测及编码区全基因的扩增、测序和序列比较，证实所分离毒株为CPV-2a亚型，并将其命名为CPV-QD12株，与2013年分离自中国江苏省的CPV-2a型犬细小毒株CPV-JS2及2011年分离自中国广西的CPV-2a型毒株CPV-JQ686671.1的编码区核苷酸相似性为99.6％，具有较近的亲缘关系。 为了解犬瘟热病毒的流行情况，采集2014年夏季以来山东省威海、青岛地区主要症状表现为间质性肺炎、肝脏黄疸及肾脏肿大等症状的病死水貂、狐狸、貉子病料并应用RT-PCR方法进行犬瘟热病毒检测，对11份犬瘟热病毒阳性组织样品的CDV的H基因进行了测序及序列分析；序列分析结果表明，山东地区CDV的H基因编码区的核苷酸同源性在99.0%至100.0%，与传统疫苗株的同源性在90.1%至91.1%，基于H基因构建的系统进化发生树显示，9株属于野毒株谱系，在基因型上与国内绝大部分分离株同属于Asia-1型，2株属于疫苗株谱系，属于America-1(Vaccine)基因型。 为三联灭活疫苗的研发提供一定的种毒材料基础，采用Marc-145细胞对副流感病毒阳性病料进行病毒分离，培养96h后的细胞培养液采用分子生物学、血凝特性等方法进行鉴定，采用RT-PCR扩增获得CPIV的F基因，并进行遗传进化分析。结果显示，成功分离到一株犬副流感病毒流行株，命名为CPIV-D121004株，遗传进化显示，分离株与分离自国外疫苗的CPIV-FC株的遗传关系最近，犬副流感病毒的流行无明显地域性差异。 本研究以犬细小病毒分离株（CPV-QD12）和本实验室保存的犬瘟热病毒（CDV）和犬副流感病毒分离株（CPIV-D12104）作为三联灭活疫苗研究用种毒，通过优化病毒增殖条件和培养方法，获得了较高滴度的病毒传代细胞培养物，用于三联灭活疫苗的制备。将制备的细胞培养病毒液用甲醛进行灭活，对灭活完全的病毒液分别辅以进口矿物质白油佐剂、赛彼科公司MONTANIDETM ISA206 VG油性佐剂以及MONTANIDETM PET GEL A新型聚合物水性佐剂制备3种不同佐剂的CDV-CPV-CPIV三联灭活疫苗，然后进行对比格犬的安全性试验，通过临床观察，发现矿物质白油佐剂和MONTANIDETM ISA206 VG油性佐剂制备的灭活疫苗皮下注射后对比格犬的皮肤和肌肉损伤严重，而新型聚合物佐剂制备的灭活疫苗粘度低，pH值呈中性，对皮肤和肌肉的安全性较好，可以作为灭活苗候选佐剂，动物试验表明制备的三联灭活疫苗可以产生相应的抗体，本研究为犬瘟热、犬细小病毒、犬副流感病毒三联灭活疫苗的进一步研究奠定了基础。